[发明专利]镧系金属掺杂碳量子点、镧系金属掺杂碳量子点-核酸适配体偶联物探针的制备方法及应用

权利要求书

1.一种镧系金属掺杂碳量子点-核酸适配体偶联物CDs(Ln)- A10-3.2纳米探针在人前列腺癌细胞爬片和人前列腺癌组织切片的荧光显微成像和质谱流式成像中的应用，该应用是非疾病诊断和/或治疗目的，其特征在于，包括如下步骤：

（1）细胞培养；

（2）细胞爬片；

（3）石蜡切片处理；

（4）细胞爬片及组织切片染色；

（5）质谱+荧光双成像技术对合成CDs(Ln)- A10-3.2纳米探针的靶向能力验证；

所述CDs(Ln)- A10-3.2纳米探针的制备方法，包括如下步骤：

取CDs (Ln)与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺混合，用无酶水稀释；孵育后，将活化的所述CDs(Ln)与3’- NH₂修饰的抗前列腺膜抗原PSMA核酸适配体A10-3.2在室温下共价连接；最终用磷酸盐缓冲液PBS通过超滤管离心清洗未反应的碳点，得到产物CDs(Ln)- A10-3.2纳米探针重悬于无酶水；

所述CDs (Ln)的制备方法，包括如下步骤：

将尿素和镧系金属盐Ln(NO₃)₃·nH₂O，溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，室温下磁力搅拌；

向N,N-二甲基甲酰胺溶液中加入柠檬酸，溶解后转移至聚四氟乙烯内衬管内，并将聚四氟乙烯内衬管放入不锈钢反应釜中；

将拧紧的所述不锈钢反应釜放入马弗炉反应后自然冷却至室温；

样品溶液转移至离心管内，离心，取上清液，得到沉淀物；

在所述沉淀物中加入乙醇，超声溶解，离心，取沉淀，重悬于乙醇，重复上述离心直至上清液澄清；

将沉淀用去离子水溶解，用透析袋透析；

旋蒸浓缩，冻干得到黑色粉末，于干燥箱保存，得到CDs(Ln)。

2.如权利要求1所述的CDs(Ln)- A10-3.2纳米探针在人前列腺癌细胞爬片和人前列腺癌组织切片的荧光显微成像和质谱流式成像中的应用，其特征在于，步骤（1）中选择人前列腺癌LNCaP和PC-3细胞系分别为PSMA阳性和阴性表达细胞系，冻存管取出后37℃速溶，取15ml离心管，加入10 ml含10%体积比胎牛血清的DMEM培养基，将冻存管中液体加入所述离心管中，轻吹混匀，1200转/min常温离心5min，去掉上清液，加入5 ml含血清培养基，轻吹制成细胞悬液，加入到培养瓶中，后将所述培养瓶放置于37℃含50 mL/L CO₂的培养箱中进行细胞培养。

3.如权利要求1所述的CDs(Ln)- A10-3.2纳米探针在人前列腺癌细胞爬片和人前列腺癌组织切片的荧光显微成像和质谱流式成像中的应用，其特征在于，步骤（2）中以载玻片为IMC仪器装载样本，首先，爬片前用丙酮、乙醇和水对所述载玻片以及硅胶模具进行超声清洗，高压消毒灭菌，将所述硅胶模具按压到处理过的所述载玻片上，把细胞培养到对数生长期，消化后滴加到所述硅胶模具内，待1-2天后，细胞接近单层且贴壁完全后，吸取培养基，迅速用PBS漂洗2次，每次3-5秒，以清除血清；用新鲜配制的预冷的4%多聚甲醛缓冲液室温固定15 min，PBS洗涤3遍后晾干保存于-20℃备用；可长期保存，做实验时，取出载玻片，PBS湿润后即可进行后续细胞染色实验。

4.如权利要求1所述的CDs(Ln)- A10-3.2纳米探针在人前列腺癌细胞爬片和人前列腺癌组织切片的荧光显微成像和质谱流式成像中的应用，其特征在于，步骤（3）中首先对石蜡包埋的组织切片进行脱蜡和复水，将载玻片放入盛有预热的抗原修复溶液的离心管中95℃放置 30 min，抗原修复液以能没过组织所在的区域为准；30 min 后，将含有所述载玻片的离心管放置在实验室工作台上，自然冷却至室温；将所述载玻片转入盛有 PBS 的染缸，放置 10 分钟，洗涤，晾干，使用 PAP 笔在切片周围画圈。