[发明专利]一种基于双重RAA-LFD技术检测副溶血性弧菌和霍乱弧菌的引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种基于双重RAA-LFD技术检测副溶血性弧菌和霍乱弧菌的特异性引物组合，其特征在于，包括两组引物；第一组引物用于特异性扩增副溶血性弧菌，上游引物序列含有SEQID No.1所示核苷酸序列，下游引物序列含有SEQ ID No.2所示核苷酸序列；

第二组引物用于特异性扩增霍乱弧菌，上游引物序列含有SEQ ID No.3所示核苷酸序列，下游引物序列含有SEQ ID No.4所示核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的特异性引物组合，其特征在于，所述第一组引物的上游引物序列如SEQ ID No.1所示，下游引物序列如SEQ ID No.2；

所述第二组引物的上游引物序列如SEQ ID No.3所示，下游引物序列如SEQ ID No.4所示。

3.根据权利要求1或2所述的特异性引物组合，其特征在于，所述的第一组引物和第二组引物，其中一组的上游引物5’端修饰生物素类化合物，下游引物5’端修饰标记物1；另一组的上游引物5’端修饰标记物2，下游引物5’端修饰生物素类化合物；所述的标记物1和2为地高辛或荧光素类化合物。

4.根据权利要求3所述的特异性引物组合，其特征在于，所述第一组引物的上游引物5’端修饰生物素类化合物，下游引物5’端修饰荧光素类化合物；第二组引物的上游引物5’端修饰地高辛，下游引物5’端修饰生物素类化合物。

5.权利要求1-4任一项所述的特异性引物组合用于制备同时检测副溶血性弧菌和霍乱弧菌的试剂盒，或者用于同时检测副溶血性弧菌和霍乱弧菌。

6.一种基于双重RAA-LFD技术检测副溶血性弧菌和霍乱弧菌的试剂盒，其特征在于，含有上述双重特异性引物组合。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，还含有RAA核酸扩增试剂盒和侧流层析试纸条中的至少一种。

8.一种基于双重RAA-LFD技术检测副溶血性弧菌和霍乱弧菌的方法，其特征在于，步骤包括：

(1)将权利要求1-4任一项所述的双重特异性引物组合与待测样品混合，配制RAA反应体系，并在36-38℃下扩增反应10-30min；

(2)取扩增产物滴加到侧流层析试纸条的样品垫末端，垂直放入缓冲液中，反应5min后读取结果。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的侧流层析试纸条上设有T1检测线和T2检测线，分别用于捕获标记物1和标记物2。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，反应时间为15-20min。