[发明专利]酸性橙I半抗原、人工抗原及其合成和应用

说明书

本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种酸性橙I半抗原、人工抗原及其合成和应用，该酸性橙I半抗原由对氨基苯磺酸与1‑羟基‑2‑萘甲酸反应制得。本发明成功合成了酸性橙I的半抗原和人工抗原，合成步骤简洁、有效；提供的细胞株SLS分泌的单克隆抗体，对酸性橙I具有较好的特异性和检测灵敏度，可实现在卤制品中检测酸性橙I残留。

技术领域

本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种酸性橙I半抗原、人工抗原及其合成和应用。

背景技术

酸性橙I(Acid Orange I)，化学名4-[(4-羟基-1-萘基)偶氮基]苯磺酸单钠盐，又名橙黄I，是一种人工合成的偶氮类染料，可用于酸碱指示剂以及皮革、纸张、织品等的染色。研究证实偶氮类色素含有偶氮键结构、萘环或有氧杂蒽结构化合物，在体内生物转化过程中，生成胺基化合物，具有致癌性，损害人体亚细胞结构，会干扰多种活性酶的正常功能，引起腹胀、腹痛、消化不良等症状。酸性橙I色泽鲜艳，着色稳定和价廉，在食品生产与加工中出现违规添加酸性橙I的现象，对消费者的健康造成严重危害。国家卫生部明确规定将酸性橙等合成色素列为非食用物质和易滥用的食品添加剂名单，禁止在食品中添加达到着色效果。因此，对酸性橙I检测方法的研究，具有重要的意义。

近年来对于人工染料的检测主要是比色和仪器分析。酶联免疫法(ELISA)是一种高效、敏感、快速的检测方法，也越来越多地应用于食品安全检测中。制备高亲和力和高特异性的单克隆抗体是免疫学检测的前提，其中人工抗原的合成是其中重要的一步。

发明内容

本发明的目的是提供一种酸性橙I半抗原、人工抗原及其合成，同时公开酸性橙I单克隆抗体杂交瘤细胞株SLS，所制备的产品用于酸性橙I免疫分析方法研究，为今后人们的研究提供了必需的人工抗原，由该细胞株制备的抗体对酸性橙I具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立酸性橙I的免疫学检测方法。

按照本发明的技术方案，所述酸性橙I半抗原，结构式如下，

相比于现有技术中酸性橙II衍生的半抗原，本发明的酸性橙I半抗原结构中活性结构暴露的位点不一样。

本发明的第二方面提供了上述酸性橙I半抗原的合成方法，由对氨基苯磺酸与1-羟基-2-萘甲酸反应制得。

进一步的，包括以下步骤，

S1：将对氨基苯磺酸溶于有机溶剂I中，在酸性条件下，加入NaNO₂溶液，反应得到A液；

将1-羟基-2-萘甲酸溶于碱性溶液或有机溶剂II中，得到B液；

S2：将所述A液加入所述B液中，调节pH为8-9，搅拌反应后调节pH至酸性，得到所述酸性橙I半抗原(命名为AOI)。

具体的，所述半抗原AOI的合成路线如下：

本发明酸性橙I半抗原的衍生过程较为简单，且得到的半抗原结构相对酸性橙I来说没有增加更多的基团，仅仅在酸性橙I的结构上增加了一个羧基(-COOH)的活性基团用于偶联蛋白，可暴露完整酸性橙I的结构。利用半抗原上的活泼位点去偶联蛋白得到的人工抗原，对应的单克隆抗体，对酸性橙I特异性强，IC50低。

进一步的，所述步骤S1中，酸性条件，可以通过加入盐酸或稀硫酸实现。

进一步的，所述对氨基苯磺酸与所述1-羟基-2-萘甲酸的摩尔比为1：0.9-1.1；优选为1：1。

进一步的，所述有机溶剂I为N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和/或二甲亚砜(DMSO)；所述碱性溶液选自Na₂CO₃溶液、NaHCO₃溶液和NaOH溶液中的一种或多种；所述有机溶剂II为乙醇和/或甲醇。