[发明专利]一种获得高毒力塞内卡病毒疫苗种毒的方法及其应用

说明书

本发明公开一种获得高毒力塞内卡病毒疫苗种毒的方法及其应用，属于兽用生物制品技术领域。本发明提供的方法包括选取经塞内卡病毒原始毒感染后的发病猪的临床症状表现最严重的发病组织，并对发病组织进行抗原分离，经细胞培养和连续多次克隆纯化获得高毒力的塞内卡病毒疫苗种毒。本发明方法能够有效获得高滴度且免疫原性强的塞内卡病毒疫苗种毒，可用于生产免疫效果特别理想的塞内卡病毒疫苗。

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种获得高毒力塞内卡病毒疫苗种毒的方法及其应用，尤其是在塞内卡病毒疫苗制备中的应用。

背景技术

塞内卡病毒(Seneca virus A，SVA)，属小RNA毒科塞内卡病毒属，该病毒感染猪后可使感染猪出现水泡性病变或死亡，成为养猪业重点关注的病毒。

目前对该病毒引起的疾病的防治主要以疫苗预防为主，在疫苗的研发过程中疫苗种毒的选择是最为重要的环节，高毒力(表现为高滴度和对本动物猪具有高致病性(即高免疫原性))的种毒直接决定疫苗的免疫效果。然而目前用于塞内卡病毒疫苗制备的塞内卡病毒疫苗种毒常常表现出滴度不高(通常在10^7.0TCID₅₀/0.1ml左右)和/或免疫原性较弱(即对本动物猪的致病性较差)的缺点，导致制备得到的塞内卡病毒疫苗免疫效果不能达到特别理想的状态。例如专利文献CN110923211A(以下称文献1)公开一种塞内卡病毒分离株(CH-HLJ CGMCC No.18851)，其病毒滴度达到10^7.0TCID₅₀/0.1ml，对本动物猪的致病率为80％，按照疫苗制备规程虽然可用于制备塞内卡病毒疫苗，并且其制备的疫苗在3ml免疫剂量条件下，首免后28天的血清中和抗体效价最高能达到1:1024，但血清中和抗体水平普遍不超过1:512。

现有技术中虽然已经公开了可以在病毒的敏感细胞中通过连续培养传代的方式逐渐提高病毒的滴度，进而获得高滴度的塞内卡病毒疫苗种毒，例如专利文献CN110551694A(以下称文献2)将SVV/CH/ZZ/2016CGMCC No.14886在其敏感细胞PK-15上连续传代12代次，可以使该病毒株的滴度由最初的10^6.5TCID₅₀/ml提高至10^7.75TCID₅₀/0.1ml，但这一方法仅能够有限提高病毒的滴度，并不一定能够提高病毒对本动物猪的致病能力，这对于制备免疫效果特别理想的塞内卡病毒疫苗产品来说可能仍是不足够的。因此有必要提供一种高毒力的塞内卡病毒疫苗种毒，以期进一步增强塞内卡病毒疫苗的免疫效力。

发明内容

针对现有技术中存在的一个或多个问题，本发明的一个方面提供一种获得高毒力塞内卡病毒疫苗种毒的方法，其包括以下步骤：

S1：选取经塞内卡病毒原始毒感染后的发病猪的临床症状表现最严重的发病组织，经处理后接种PK-15细胞，培养传代至能够使PK-15细胞产生明显且典型的细胞病变(优选培养传代至首次能够使PK-15细胞产生明显且典型的细胞病变)，收获病毒液；

S2：取步骤S1收获的病毒液进行连续N代次病毒克隆纯化，获得N个种毒，其中N≥1；

S3：对步骤S2每次克隆纯化后获得的种毒的滴度进行检测，以获得高滴度塞内卡病毒种毒，所述高滴度塞内卡病毒种毒满足：种毒的滴度≥10^8.0TCID₅₀/0.1ml；

S4：检测步骤S3获得的高滴度塞内卡病毒种毒对健康猪的致病能力，直至获得高毒力塞内卡病毒疫苗种毒；

所述高毒力塞内卡病毒疫苗种毒满足：种毒的滴度≥10^8.0TCID₅₀/0.1ml，且所述种毒对本动物猪的致病率≥80％。