[发明专利]一种抑菌型芽孢杆菌及其液体发酵步骤、抑菌试验方法

说明书

本发明涉及一种抑菌型芽孢杆菌及其液体发酵步骤、抑菌试验方法；本发明所述的抑菌型芽孢杆菌保藏地点为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏时间为2021年4月6日；保藏登记入册编号为CGMCC No.22124。本发明的优点有：通过液体发酵后仍然对大肠杆菌和沙门氏菌等致病菌具显著的抑菌性能，并且长期放置稳定性高，耐酸、耐胆盐强、能够工业规模化生产，更有利于微生态制剂产品的替抗。

技术领域

本发明属于新保藏菌种种类技术领域；尤其涉及该菌种的液体发酵步骤、抑菌试验方法。

背景技术

抗生素是20世纪最伟大的发现之一，近百年来，仅青霉素就拯救了大约2亿人的生命。抗生素在给人类带来益处的同时也给养殖业创造了巨大的经济效益。1951年，随着美国食品与药物管理局(FDA)首次批准在饲料中添加非处方型抗生素。由此，在全球范围内，低剂量的抗生素作为生长促进剂(Antibiotics as Growth Promoter，AGP)被加入常规饲料中在畜牧行业内广泛应用。它也见证了国际畜牧业的飞速发展。近70年来，先后有60余种抗生素应用于畜牧养殖业。然而由于抗生素在畜禽饲料中的广泛使用尤其是超标使用，给细菌提供了足够的机会以进化出应对各种药物的耐药性，进而导致各种病原菌的耐药性得出现，直接威胁着畜牧和人类健康。随着1986年，瑞典的在饲料中全面禁止添加抗生素，国外等国家开始陆续禁抗，随着2019年农业农村部第194号公告的颁布，我国在2020年7月1号开始也实行全面禁抗，微生态制剂通过改变肠道菌群平衡，促进动物肠道健康，提高动物的免疫力和消化吸收率，同时也可以产生抑菌型的代谢产物，对各种致病菌具有很强的抑菌效果，并且不会产生耐药性，是替代抗生素的首要手段之一。

发明内容

本发明正是为了解决上述问题缺陷，提供一种抑菌型芽孢杆菌及其液体发酵步骤、抑菌试验方法。本发明通过筛选得到一株芽孢杆菌，通过液体发酵发现它可以对大肠杆菌、沙门氏菌等常见致病菌具有光谱抑菌效果，而且其抑菌效果显著，为用微生态制剂替代抗生素提供了一种新的可能。

本发明采用如下技术方案实现。

一种抑菌型芽孢杆菌，本发明所述的抑菌型芽孢杆菌保藏地点为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏时间为2021年4月6日；保藏登记入册编号为CGMCCNo.22124。

本发明所述的抑菌型芽孢杆菌参据生物材料为OKX101。

本发明上述的抑菌型芽孢杆菌的液体发酵步骤，包括如下步骤：

步骤1)菌种活化；步骤2)制备一级种子；步骤3)制备二级种子罐；步骤4)液体发酵培养基配置；步骤5)液体发酵；步骤6)喷雾干燥。

本发明上述的液体发酵步骤，其步骤具体为，

步骤1)菌种活化

将OKX101(保藏号为GCMCC22124)的甘油管通过划线接入到LB固体的平板上，37℃倒置培养18-24h，然后挑取单菌落接入到LB液体摇瓶中，37℃、200r/min摇床培养12-16h左右，然后将其稀释涂布到LB平板，37℃倒置培养12-18h，作为种子平板；

步骤2)制备一级种子

用接种环从种子平板上挑取单菌落接入到装有LB培养基中的三角摇瓶中，30-40℃静置培养12-18h，作为一级种子摇瓶；

步骤3)制备二级种子罐

按照1～10％的比例接入到装有LB液体培养基的种子罐中，装液量为20-40L，发酵温度30-40℃、搅拌转速150-250转/min，培养12-18h，作为二级种子罐；

步骤4)液体发酵培养基配置