[发明专利]用于敲低猪SAMHD1基因表达的siRNA、试剂盒及其应用

说明书

本发明属于分子生物学和细胞生物学制备技术领域，公开了一种用于敲低猪SAMHD1基因表达的siRNA、试剂盒及其应用，所述siRNA的正义链为SEQ ID NO.1所示的碱基序列，所述siRNA的反义链为SEQ ID NO.2所示的碱基序列。本发明用于敲低猪SAMHD1基因表达的siRNA，敲低效率高，适用于以慢病毒为工具的猪源细胞感染实验操作，可使猪源细胞的慢病毒感染效率得到明显提高，应用前景广阔。

技术领域

本发明属于分子生物学和细胞生物学制备技术领域，涉及一种用于敲低猪SAMHD1基因表达的siRNA、试剂盒及其应用。

背景技术

慢病毒属隶属于反转录病毒科，多于巨噬细胞、淋巴细胞内原发感染，经过漫长的潜伏期才使个体表现出明显的临床症状，因其特点，此类病毒被称作慢病毒。常用的慢病毒载体是以人类免疫缺陷I型病毒(HIV-1)，具有广泛感染、有效感染分裂期和静止期细胞，在宿主染色质中插入大的遗传片段，并长期维持稳定转基因表达等优点，因此成为导入外源基因的有利工具。受限于慢病毒的感染效率，使慢病毒载体的应用被收到限制。另外，目前还没有找到能够提高不同细胞感染效率的敲低基因。

发明内容

本发明的目的在于提供用于敲低猪SAMHD1基因表达的siRNA、试剂盒及其应用，基因敲低效率高，可使不同猪源细胞的慢病毒感染效率得到明显提高。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供一种用于敲低猪SAMHD1基因表达的siRNA，所述siRNA的正义链为SEQID NO.1所示的碱基序列，所述siRNA的反义链为SEQ ID NO.2所示的碱基序列。

本发明还提供含有上述的siRNA的试剂盒。

优选地，所述试剂盒还包括慢病毒包装质粒；所述慢病毒包装质粒包括pLenti-gfp、pMD2G和pSPAX2三种环状质粒。

优选地，所述慢病毒包装时采用摩尔比1:1:1为pLenti-gfp、pMD2G和pSPAX2的三种环状质粒共转染。

优选地，所述siRNA转染至细胞时要求终浓度为150nM/μL。

优选地，所述siRNA转染至细胞时转染时机为慢病毒感染细胞前12h。

本发明还提供上述试剂盒在提高慢病毒感染猪源细胞效率中的应用。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

本发明用于敲低猪SAMHD1基因表达的siRNA，敲低效率高，适用于以慢病毒为工具的猪源细胞感染实验操作，可使不同猪源细胞(如IPAM、BMDM)的慢病毒感染效率得到明显提高，应用前景广阔。

附图说明

图1为不同siRNA转染敲低猪SAMHD1基因表达效率。

图2为siRNA-5在不同转染终浓度下的敲低效率。

图3为siRNA-5在转染不同时间后的敲低效率。

图4为质粒共转染后24h通过荧光倒置显微镜观察到的结果。

图5为siRNA-5的荧光定量PCR扩增曲线。

图6为荧光定量PCR熔解曲线。

图7为siRNA-5敲低效率检测结果。

图8为IPAM细胞在36hpi时间点的显微成像结果。

图9为IPAM细胞在48hpi时间点的显微成像结果。

图10为IPAM细胞在60hpi时间点的显微成像结果。

图11为IPAM细胞在72hpi时间点的显微成像结果。