[发明专利]一种模块化组织工程骨-韧带-骨移植物及其制备方法

说明书

本发明涉及一种模块化组织工程骨‑韧带‑骨移植物的制备方法，步骤包括：在取向胶原纤维膜的两端采用梯度化学沉淀法，掺杂入β‑磷酸三钙，所掺杂入β‑磷酸三钙的密度自端部向中间逐渐减少，制得胶原‑磷酸三钙膜；在胶原‑磷酸三钙膜上涂覆富血小板血浆‑纤维蛋白凝胶，制得骨‑韧带‑骨膜；在骨‑韧带‑骨膜上接种种子细胞，体外培养，制得组织工程骨‑韧带‑骨膜；将若干组织工程骨‑韧带‑骨膜重叠复合，即得组织工程骨‑韧带‑骨移植物。本发明构建一种模拟骨‑韧带‑骨的类器官结构，体外探索韧带损伤及腱‑骨界面愈合的分子机制，进一步利用上述类器官制备组织工程骨‑韧带‑骨移植物，进行韧带损伤和腱‑骨界面组织的修复与再生。

技术领域

本发明涉及医疗领域，尤其涉及一种模块化组织工程骨-韧带-骨移植物及其制备方法。

背景技术

韧带(例如交叉韧带，侧副韧带等)软组织损伤是非常常见的运动损伤，在青少年运动中50％受伤是韧带扭伤。同时，前交叉韧带(ACL)损伤的发生率比过去十年增加了1.3％。除了运动人群，糖尿病患者肌腱韧带受伤的概率是非糖尿病患者的十倍。随着年龄的增长，80％的老年人经历过韧带断裂和肌腱损伤。尽管肌腱韧带损伤是非常常见的，而且会对个人、家庭和经济造成巨大影响，但在预防及损伤后修复方面所取得的进展有限。

目前对于韧带损伤的预防和治疗，主要有制动固定、药物治疗和手术修补。制动固定是通过石膏固定患肢，避免活动再次损伤韧带组织；药物治疗主要是通过药学作用促进韧带组织的修复或减轻疼痛；手术修补是通过手术恢复损伤的物理结构促进其愈合。但是目前的治疗手段常常导致韧带组织的疤痕愈合，甚至是不愈合，主要原因在目前的对于韧带损伤愈合与再生的机制理解不深入，并且目前修复韧带损伤缺乏高效优质的肌腱移植物或肌腱修补物。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种模块化组织工程骨-韧带-骨移植物及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

本发明的第一方面是提供一种模块化组织工程骨-韧带-骨移植物的制备方法，步骤包括：

S1、在取向胶原纤维膜的两端采用梯度化学沉淀法，掺杂入β-磷酸三钙，所掺杂入β-磷酸三钙的密度自端部向中间逐渐减少，制得胶原-磷酸三钙膜；在所述胶原-磷酸三钙膜上涂覆富血小板血浆-纤维蛋白凝胶，制得骨-韧带-骨膜；

S2、在所述骨-韧带-骨膜上接种种子细胞，体外培养，制得组织工程骨-韧带-骨膜；

S3、将若干所述组织工程骨-韧带-骨膜重叠复合，即得所述组织工程骨-韧带-骨移植物。

优选地，所述取向胶原纤维膜由胶原经静电纺丝技术制得。

优选地，所述取向胶原纤维膜的厚度为0.01-1mm。

进一步地，所述取向胶原纤维膜的厚度为0.02-0.2mm。

优选地，所掺杂入β-磷酸三钙的厚度为0.01-1mm。

进一步地，所掺杂入β-磷酸三钙的厚度为0.02-0.2mm。

优选地，所掺杂入β-磷酸三钙的密度为0-3g/cm³。

进一步地，所掺杂入β-磷酸三钙的密度为0.01-1g/cm³。

优选地，所述富血小板血浆-纤维蛋白凝胶由富血小板血浆与纤维蛋白按1:3-3:1的比例混合制得。

优选地，所述富血小板血浆由外周血液依次经抗凝以及体外离心(不加入凝血酶)后制得。

优选地，所述体外培养以所述富血小板血浆-纤维蛋白消耗了80％-90％为培养终点。

优选地，所述组织工程骨-韧带-骨膜重叠复合的数量为6-60片。