[发明专利]一种蜂花粉酵素的制备方法

权利要求书

1.一种蜂花粉酵素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

a制备种子液：将植物乳杆菌322Hp(Lactobacillus plantarum 322Hp)、嗜酸乳杆菌322Ha(Lactobacillus acidophilus 322Ha)及罗伊氏乳杆菌322Hr(Lactobacillusreuteri 322Hr)从斜面培养基或甘油保藏管中分别接种至MRS培养基中于37℃、180r/min摇床内振荡培养28-36h；

b制备酵素发酵培养基：将巴氏灭菌后的蜂蜜添加到无菌水中，然后添加经机械破壁后的蜂花粉，混合均匀；

c制备酵素发酵液：将种子液以10～15％的比例(v/v)接种至步骤b的蜂花粉酵素发酵培养基中，置于37-40℃摇床中振荡培养48-60h；

d制备酵素成品：将发酵好的酵素液进行后续处理。

2.根据权利要求1所述的蜂花粉酵素的制备方法，其特征在于：在步骤a中，所述MRS培养基为蛋白胨10g/L，牛肉膏5g/L，酵母膏4g/L，葡萄糖20g/L，磷酸氢二钾2g/L，三水合乙酸钠5g/L，柠檬酸氢二铵2g/L，七水合硫酸镁0.2g/L，一水合硫酸锰0.005g/L，所述MRS培养基的pH为6-6.5。

3.根据权利要求1所述的蜂花粉酵素的制备方法，其特征在于：在步骤b中，蜂蜜(含糖度为78～85Brix)添加比例为10-20g/L，蜂花粉添加比例为500-550g/L。

4.根据权利要求3所述的蜂花粉酵素的制备方法，其特征在于：在步骤b中，所述的蜂花粉可为油菜花粉、荷花粉、荞麦花粉、玉米花粉及茶花粉中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的蜂花粉酵素的制备方法，其特征在于：机械破壁的方法为气流粉碎机破壁。

6.根据权利要求1所述的蜂花粉酵素的制备方法，其特征在于：在步骤c中，接种至发酵培养基中的植物乳杆菌322Hp(Lactobacillus plantarum 322Hp)、嗜酸乳杆菌322Ha(Lactobacillus acidophilus 322Ha)及罗伊氏乳杆菌322Hr(Lactobacillus reuteri322Hr)的体积比为1:1:1～3:1:1。

7.根据权利要求6所述的蜂花粉酵素的制备方法，其特征在于：在步骤c中，接种至发酵培养基中的植物乳杆菌322Hp(Lactobacillus plantarum 322Hp)、嗜酸乳杆菌322Ha(Lactobacillus acidophilus 322Ha)及罗伊氏乳杆菌322Hr(Lactobacillus reuteri322Hr)的体积比为3:1:1。

8.根据权利要求1所述的蜂花粉酵素的制备方法，其特征在于：在步骤c中，振荡培养时摇床的转速为150-210r/min。

9.根据权利要求1所述的蜂花粉酵素的制备方法，其特征在于：在步骤a和c中，所述植物乳杆菌322Hp(Lactobacillus plantarum 322Hp)保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20211049，保藏时间为2021年8月18日；所述嗜酸乳杆菌322Ha(Lactobacillus acidophilus 322Ha)保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M 20211048，保藏时间为2021年8月18日；所述罗伊氏乳杆菌322Hr(Lactobacillusreuteri 322Hr)保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20211050，保藏时间为2021年8月18日。

10.根据权利要求1所述的蜂花粉酵素的制备方法，其特征在于：在步骤d中，所述后续处理包括低温冷冻干燥及压片。