[发明专利]一种白脚虾小RNA病毒基因及其应用

说明书

本发明公开了一种白脚虾小RNA病毒的基因及其应用。本发明在所述白脚虾小RNA病毒基因的基础上，建立了白脚虾小RNA病毒的巢式和荧光定量PCR检测方法。所建立的巢式PCR方法与荧光定量PCR方法的灵敏度高、重复性和特异性好，最低检测限均为10 copies/μL，可用于筛选无毒种虾或虾苗，适于向淡水虾的基层养殖单位推广使用。

技术领域

本发明属于水产病原的检测技术领域。更具体地，涉及一种白脚虾小RNA 病毒基因及其应用。

背景技术

白脚虾(Macrobrachium rosenbergii)即罗氏沼虾，目前在我国的广东、广西、湖南、湖北、江苏、上海、浙江等10多个省、市、自治区均有养殖，为多地区农民增收做出了重要贡献。养殖过程中“铁壳虾”的出现影响了白脚虾养殖业的发展，感染“铁壳虾”病的白脚虾幼虾多长到5cm～6cm就停止生长，同时出现性早熟现象，虽不会死亡，但产量下降，给养殖户带来了巨大损失。

目前已知的可引起白脚虾白斑综合征的白斑综合征病毒(white spot syndromevirus，WSSV)，引起肌肉白浊病(白尾病)的野田村病毒(Macrobrachium RosenbergiiNodavirus，MrNV)，感染白脚虾肝胰腺上皮细胞的细小病毒样病毒 (parvo-like virus，HPV)以及引起白脚虾幼体综合征的太湖病毒(Macrobrachium rosenbergii Taihu virus，MRTV)等，都已建立了相应的检测方法。例如，中国专利CN102277453A公开了一种白脚虾双顺反子病毒的LAMP检测试剂盒及检测方法。而“铁壳虾”病的病原尚未确立，若能针对“铁壳虾”体内的病毒进行分析并建立相应的检测方法，对“铁壳虾”病的防治具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种白脚虾小RNA病毒基因及其应用。

本发明的第一个目的是提供一种白脚虾小RNA病毒基因。

本发明的第二个目的是提供所述基因在制备检测白脚虾小RNA病毒的产品中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种用于检测白脚虾小RNA病毒的引物。

本发明的第四个目的是提供所述引物在制备检测白脚虾小RNA病毒的产品中的应用。

本发明的第五个目的是提供一种检测白脚虾小RNA病毒的试剂盒。

本发明的第六个目的是提供一种检测白脚虾小RNA病毒的巢式PCR方法。

本发明的第七个目的是提供一种检测白脚虾小RNA病毒的荧光定量PCR方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明对表现出“铁壳”的白脚虾体内的病毒进行了富集，并通过宏病毒组学分析发现了一种新的小RNA病毒，暂命名为Macrobrachium rosenbergii picorna virus 12(MrPV-12)，其基因组序列如SEQ ID NO.1所示。MrPV-12的系统发育分析结果表明，其与小RNA病毒目Picornavirales下8个科内多个属的代表种以及未分类到属的暂定种的亲缘关系较远，分属不同科，其与亲缘关系相对最近的 MrPV-7病毒也仍还有较远的进化距离。

本发明以白脚虾小RNA病毒MrPV-12基因组中第3635～4167位的核苷酸序列(SEQID NO.2)为靶基因，设计筛选得到了巢式PCR引物MrPV-12-1-F/R 和MrPV-12-2-F/R及荧光定量PCR引物MrPV-12-q-F/R，并建立了相应的检测方法。

本发明首先提供了一种白脚虾小RNA病毒基因，基因序列如SEQ ID NO.2 所示。