[发明专利]一种植物的细胞杂交技术

权利要求书

1.一种植物的细胞杂交技术，其特征在于，包括以下步骤：

(一)设备与原料选择：准备培养皿、恒温培养箱、破碎机、摇瓶机、超净工作台、无菌室、实验田、吸水纸和紫外灯，准备好培养基、外植体、过氧化氢、无菌水、生理盐水、蒸馏水、纤维素酶、糖和琼脂；

(二)受体培养：根据选择的植物种类，在琼脂内混入合适的培养营养成分，从而获得培养该植物的培养基，之后利用组织培养技术在培养基上培养出植物受体，从而获得优良的该植物的受体组织；

(三)外植体处理：采集具有优良抗性基因的植物外植体，然后选取外植体的的叶片或茎尖，然后进行冲洗，之后消毒杀菌，再进行二次冲洗，之后将表面水分吸干，从而获得无菌外植体；

(四)外植体破碎：将处理后的无菌外植体放置于破碎机中进行破碎，从而获得含有优良空心基因的植物细胞的溶液；

(五)破壁溶液的制备：将纤维素、糖和琼脂等材料和蒸馏水混合，并将其摇匀，从而获得破壁溶液，并将其存放在合适的温度下进行保存；

(六)突变体培养：将外植体放入破壁溶液中，同时加入培育出的受体愈伤组织，然后通过摇瓶机进行摇瓶培养，使得与原生植体相互之间融合，通过原生植体融合导入所要得到的目的基因，从而得到所需要的突变体；

(七)愈伤组织培养：去除突变体的愈伤组织，之后将愈伤组织通过无菌水冲洗，之后将愈伤组织放置在无菌环境下，并通过紫外灯照射诱变受体的愈伤组织一段时间，然后再将愈伤组织放置一段时间，等到破壁的外植体伤口有所修复后再次放置在培养基中，通过培养皿在恒温培养箱内进行培养，从而获得含有目的基因的植体；

(八)筛选测产：将培养出的外植体按照一定数量分组，现将根苗移砂栽培，再进行容器土栽，之后选择生长旺盛，强健的植株，移栽入实验田内进行进一步筛选和测产；

(九)稳定植株培养：将筛选出来的优良植株进行取样，再次利用组织培养技术培养这部分取样组织，使得优良的基因性状得以继承并固化，从而培育出兼有双亲优良性状且稳定遗传的植株。

2.根据权利要求1所述的一种植物的细胞杂交技术，其特征在于：所述步骤(二)中，在进行培养基配制时，保证培养基的控制PH值为5.5-6之间，在进行培养时，应当保证培养环境无菌，且培养时温度控制在23℃-27℃。

3.根据权利要求1所述的一种植物的细胞杂交技术，其特征在于：所述步骤(三)中，在进行外植体的第一次冲洗时采用无菌水进行冲洗，之后通过10％-12％的过氧化氢进行消毒杀菌，然后再利用生理盐水进行二次冲洗，最后通过无菌的吸水纸将外植体表面水分吸干。

4.根据权利要求1所述的一种植物的细胞杂交技术，其特征在于：所述步骤(四)中，在外植体破碎时，应当保证在无菌室内进行操作，并且破碎工作应当在超净工作台上进行。

5.根据权利要求1所述的一种植物的细胞杂交技术，其特征在于：所述步骤(五)中，在进行破壁溶液配制时，应当控制配制溶液的PH值为4.5-5.0，在保存纤维素酶溶液时，控制保存温度为0℃-4℃。

6.根据权利要求1所述的一种植物的细胞杂交技术，其特征在于：所述步骤(六)中，在摇瓶培养过程中，摇瓶培养的温度控制25℃-27℃之间，摇瓶培养时间为六小时，且摇瓶培养前两个小时摇瓶转速控制在150转/分钟，后四个小时摇瓶转速控制在70转/分钟。

7.根据权利要求1所述的一种植物的细胞杂交技术，其特征在于：所述步骤(七)中，紫外灯功率选择15W，且进行紫外灯照射之前需要将紫外灯开启放置20-30分钟，等待紫外光波稳定，之后再进行照射时，控制紫外灯到愈伤组织距离为30CM，并且控制照射时间为55-65秒，在组织进行培养时，控制培养的PH值外5.5-6.0，温度控制在23℃-27℃。

8.根据权利要求1所述的一种植物的细胞杂交技术，其特征在于：所述步骤(八)中，选择分组时控制每组不超过50株，且进行根苗移砂栽培时，控制砂中PH为5.8，控制温度18℃-27℃，湿度为80％-90％，进行容器土栽时，控制温度为25℃-30℃，在容器土栽30天作用移栽到大田内。

9.根据权利要求1所述的一种植物的细胞杂交技术，其特征在于：所述步骤(九)中，在进行性状加固时，需要保证培育组织中不会混入原始性状植株。