[发明专利]石山苦蜜素A及其制备方法与龙须藤蜂蜜的鉴别方法

权利要求书

1.石山苦蜜素A，其特征在于，具有式(1)所示的结构：

2.一种制备权利要求1所述的石山苦蜜素A的方法，其特征在于，通过高效液相色谱法对蜂蜜中的酚类成分进行分离获得，所述蜂蜜包括龙须藤蜂蜜；

进行高效液相色谱分离时，流动相A为浓度为0.18-0.22％的乙酸的水溶液，流动相B为浓度为0.18-0.22％的乙酸的甲醇溶液；

梯度洗脱程序为：0～11min，流动相B由9％上升至14％；11～14min，流动相B由14％上升至15％；14～17min，流动相B保持15％；17～24min，流动相B由15％上升至16％；24～28min，流动相B由16％上升至17％；28～30min，流动相B由17％上升至22％；30～41min，流动相B保持22％；41～46min，流动相B由22％上升至23％；46～55min，流动相B由23％上升至25％；55～60min，流动相B由25％上升至28％；60～70min，流动相B由28％上升至30％；70～80min，流动相B由30％上升至40％；80～90min，流动相B由40％上升至45％；90～100min，流动相B由45％上升至52％；100～110min，流动相B由52％上升至57％；110～120min，流动相B由57％上升至65％；120～130min，流动相B由65％上升至70％；130～135min，流动相B由70％上升至80％；

色谱柱为Phenomenex Gemini C18色谱柱，流速为0.6-0.8mL/min，进样量为20μL，柱温为34-36℃，检测波长为270nm；

所述高效液相色谱法还包括在进行高效液相色谱分离前，以固相萃取柱对蜂蜜中的酚类成分进行提取的步骤；具体采用Strata-X-A固相萃取柱提取，以甲醇作为活化剂、水作为平衡剂和淋洗剂，以浓度为9-11％的甲酸的甲醇溶液作为洗脱剂，最后将获得的洗脱液吹干，以甲醇复溶后，过滤获得；过滤时滤膜的孔径为0.22μm；

在以固相萃取柱对蜂蜜中的酚类成分进行提取前，还包括蜂蜜预处理的步骤，具体包括：将蜂蜜与水混合后，调节pH值为6.5-7，8800-9200rpm离心18-22min后，取上清液备用；

通过高效液相色谱法对蜂蜜中的酚类成分进行分离后，收集目标峰洗脱液，所述目标峰的保留时间为26.93min。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述流动相A为浓度为0.2％的乙酸的水溶液，所述流动相B为浓度为0.2％的乙酸的甲醇溶液；流速为0.7mL/min，柱温为35℃。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述洗脱剂为浓度为10％的甲酸的甲醇溶液。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述蜂蜜预处理的步骤中，包括：将蜂蜜与水混合后，调节pH值为6.8，9000rpm离心20min后，取上清液备用。

6.一种龙须藤蜂蜜的鉴别方法，其特征在于，通过高效液相色谱法对待测蜂蜜中的酚类成分进行检测，当所述酚类成分中同时包括石山苦蜜素A、石山苦蜜素B、反，反式脱落酸、光色素和顺，反式脱落酸时，则判定所述待测蜂蜜为龙须藤蜂蜜；

所述石山苦蜜素A如权利要求1中所述，所述石山苦蜜素B具有式(2)所示的结构：

7.根据权利要求6所述的鉴别方法，其特征在于，当所述待测蜂蜜中所述石山苦蜜素A的含量为5.40-9.81mg/kg，石山苦蜜素B的含量为17.10-32.87mg/kg，反，反式脱落酸的含量为6.37-11.01mg/kg，光色素的含量为3.11-28.34mg/kg，顺，反式脱落酸的含量为6.65-14.11mg/kg时，则判定所述待测蜂蜜为龙须藤蜂蜜。