[发明专利]石油降解菌的筛选方法及固定化方法和该固定化菌剂的应用

说明书

本发明公开了一种石油降解菌的筛选方法及固定化方法和该固定化菌剂的应用，包括步骤(1)将油田污泥接种到富集培养基中进行培养得到富集培养基悬浮液；(2)将富集培养基悬浮液接种到LB固体培养基上进行培养得到单一菌落；(3)将单一菌落接入到无机盐培养基，进行去除试验制得石油去除率高的目标菌种；(4)将目标菌种进行复配，接入到无机盐培养基进行去除试验；富集培养基包括蛋白胨、酵母膏浸出粉、NaCl；无机盐培养基包括NH₄NO₃、KH₂PO₄、K₂HPO₄、MgSO₄·7H₂O、FeCl₃、CaCl₂。通过该筛选方法能够筛选及复配得到含六种石油降解菌的高效石油降解菌，对石油烃具有较好的去除效果。

技术领域

本发明涉及石油污染土壤修复技术领域，更具体地涉及一种石油降解菌的筛选方法及固定化方法和该固定化菌剂的应用。

背景技术

石油对环境的污染主要发生在水体和土壤中，石油开采和使用的每一个环节都可能产生污染物。石油类污染物中的三致(致癌、致畸、致突变)物质也会被水体和土壤中的动植物富集，并通过食物链传递给人体，严重威胁到人类的身体安全。

传统石油污泥修复方法，主要有物理法修复和化学法修复。物理法修复石油污泥主要有隔离法、换土法及焚烧法。其中隔离法由于土壤自身降解能力有限，其石油烃毒性仍在，具有二次污染的风险。换土法具有较高的成本，且破坏了土壤原生生态环境。焚烧法具有很高的成本，不仅破坏了土壤的物化结构且焚烧产生的有毒性气体需要额外处理。化学法修复石油污泥主要有萃取法、土壤洗涤法和氧化还原法。其中萃取法和土壤洗涤法成本较高、操作难度较大、使用的萃取剂和洗涤剂为难降解污染物，容易造成二次污染，过程中产生的废水需要额外处理。氧化还原法额外添加的试剂容易使土壤酸碱化。

因此，研发者开发出微生物修复技术对石油污泥进行修复。已知本领域技术中采用固定化微生物法修复石油污染海水，可以提高单位被污染水域内的微生物量，加强生物修复技术的效果，达到修复石油污染海域的生态效果。目前，从提高生物量角度，主要是采用固定化技术。传统的固定化载体材料采用海藻酸钙，其在碱性、高盐度条件下具有易分解、耐受性差的问题。后面采用聚氨酯泡沫作为载体，但仍存在表面积不够大，制得微生物不够稳定，对石油处理降解率不高的问题。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种石油降解菌的筛选方法，能够筛选及复配得到含六种石油降解菌的高效石油降解菌，对石油烃具有较好的去除效果。

本发明的目的之二是提供一种石油降解菌的固定化方法，该石油降解菌的固定化方法可有效解决传统的固定化载体材料海藻酸钙存在碱性、高盐度条件下具有易分解、耐受性差的问题，

本发明的目的之三是提供上述方法制得的固定化石油降解菌用于修复石油污染的土壤。

为实现本发明目的，本发明提供一种石油降解菌的筛选方法，包括步骤：

(1)将油田污泥接种到富集培养基中进行培养，得到富集培养基悬浮液；

(2)将处于对数期的富集培养基悬浮液接种到LB固体培养基上进行培养，得到单一菌落；

(3)将单一菌落接入到以石油作为唯一碳源的无机盐培养基，进行去除试验，制得石油去除率高的目标菌种；

(4)将目标菌种进行复配，接入到以石油作为唯一碳源的无机盐培养基，进行去除试验，检测培养基中石油降解率，去除率高的复配菌株为石油降解菌；

富集培养基包括蛋白胨、酵母膏浸出粉、NaCl；