[发明专利]一种具有免疫调节活性的点柄乳牛肝菌多糖SGP2-1及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种具有免疫调节活性的点柄乳牛肝菌多糖SGP2-1，其特征在于：该点柄乳牛肝菌多糖SGP2-1的主要重复单元的结构如下所示，重均分子量为150.75kDa：

2.根据权利要求1所述的一种具有免疫调节活性的点柄乳牛肝菌多糖SGP2-1，其特征在于：所述点柄乳牛肝菌多糖SGP2-1的糖含量为94.84wt％。

3.根据权利要求1所述的一种具有免疫调节活性的点柄乳牛肝菌多糖SGP2-1，其特征在于：所述点柄乳牛肝菌多糖SGP2-1主要由摩尔比为2.4:28.2:1.0的甘露糖、葡萄糖和木糖组成。

4.根据权利要求1～3任一项所述的点柄乳牛肝菌多糖SGP2-1的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将粉碎过筛的点柄乳牛肝菌粉末脱脂处理，干燥后得到点柄乳牛肝菌脱脂粉末；

(2)向点柄乳牛肝菌脱脂粉末中加去离子水，提取多次，过滤后合并上清液，减压浓缩，得浓缩液；

(3)浓缩液经分级醇沉、复溶沉淀、除蛋白、透析、冷冻干燥后获得粗多糖冻干粉；

(4)取粗多糖冻干粉配置成粗多糖溶液，经离子交换柱分离洗脱，苯酚硫酸法测定，收集目标组分峰洗脱产物，经浓缩、透析、冷冻干燥后获得SGP2组分；

(5)将SGP2组分经分子筛进一步分离，采用苯酚-硫酸法检测多糖含量，收集目标组分峰洗脱产物，合并后的溶液经浓缩、透析、冷冻干燥后得到点柄乳牛肝菌多糖SGP2-1。

5.根据权利要求4所述的点柄乳牛肝菌多糖SGP2-1的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)具体按照以下步骤：将点柄乳牛肝菌子实体超微粉碎后过100目筛，得点柄乳牛肝菌粉末，按照料液比1g：20mL，向粉末中加入95vt％的乙醇，75℃提取2h，重复操作一次，过滤后收集沉淀并在60℃烘干，得到点柄乳牛肝菌脱脂粉末；

所述步骤(2)具体按照以下步骤：按照料液比1g：20-40mL，向点柄乳牛肝菌脱脂粉末中加去离子水，90℃提取2h，得水提液，重复操作2次，脱脂棉纱过滤后合并上清液，60℃减压浓缩，得浓缩液；

所述步骤(3)具体按照以下步骤：向浓缩液中加入无水乙醇，使乙醇终浓度为30vt％，在4℃静置3h沉淀不溶性多糖，以转速6000r/min离心10min收集上清液；继续往上清液中加入无水乙醇，使乙醇终浓度为80vt％，4℃下醇沉16h，在4℃以转速6000r/min离心10min收集沉淀；将沉淀物溶解于去离子水中，得到多糖溶液；向多糖溶液中加入同等体积的Sevage试剂，所述Sevage试剂为体积比为4:1的氯仿-正丁醇混合液，倾入分液漏斗中剧烈震摇30min，在4℃以转速6000r/min离心10min分层，取上清，重复除蛋白直到两相分界处无白色絮状物，并旋蒸去除有机溶剂；随后将去除蛋白的多糖溶液采用3500Da透析袋透析72h，冷冻干燥得到粗多糖。

6.根据权利要求4所述的点柄乳牛肝菌多糖SGP2-1的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)具体按照以下步骤：将粗多糖配制成浓度为25mg/mL的溶液，经DEAE-Sepharose fastflow离子交换柱分离，依次用浓度为0、0.1、0.2、0.3、0.5、1.0M的NaCl溶液洗脱，洗脱流速为2mL/min，洗脱时间为4min/管，使用全自动部分收集器收集，采用苯酚-硫酸法检测多糖的含量，收集0.1M NaCl溶液洗脱组分，浓缩后采用3500Da透析袋透析72h，冷冻干燥得SGP2组分；

所述步骤(5)具体按照以下步骤：将SGP2组分配制成浓度为8mg/mL的溶液，经Sephacryl S-300 HR凝胶渗透柱分离纯化，用0.1M NaCl溶液洗脱，洗脱流速为1mL/min，洗脱时间为8min/管，使用全自动部分收集器收集，采用苯酚-硫酸法测定多糖含量并绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集第一个组分峰，再经浓缩、3500Da透析袋透析72h、冷冻干燥后得到点柄乳牛肝菌多糖SGP2-1。

7.根据权利要求1～3任一项所述的点柄乳牛肝菌多糖SGP2-1在制备功能性食品及免疫调节剂药物中的应用。