[发明专利]一种海桑果内生真菌及其在制备抗肿瘤活性化合物中的应用

说明书

本发明涉及一种海桑果内生真菌及其在制备抗肿瘤活性化合物中的应用，所述内生真菌的保藏编号为CGMCC No.23226；分类命名：土曲霉Aspergillus terreus。可用于同时制备抗肿瘤化合物1‑3：

技术领域

本发明属于真菌活性次级代谢产物领域，具体涉及一种海桑果内生真菌及其在制备抗肿瘤活性化合物中的应用。

背景技术

根据IUCN的标准，我国20种濒危红树植物中，红榄李、海南海桑、卵叶海桑和拉氏红树4种植物属于极危等级。但是目前，只有很少量的对海桑属植物化学成分研究的报道，其中得到的化合物结构类型丰富多样，有新颖骨架的二聚α-烷基丁内酯类化合物内酯甲素、五环三萜类化合物、倍半萜类、5,8双氧环麦角甾类和木脂素类化合物。本发明提供一种海桑果内生真菌(HSG11-9)及其在制备抗肿瘤活性化合物中的应用。

发明内容

本发明提供一种海桑果内生真菌(HSG11-9)，其特征在于其菌种保藏信息：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2021年9月8日；保藏编号：CGMCCNo.23226；分类命名：土曲霉Aspergillus terreus。

本发明的另一实施方案提供一种利用上述海桑果内生真菌HSG11-9同时制备化合物1-3的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)配制种子培养基，将上述海桑果内生真菌HSG11-9接入种子培养基，26℃，培养3天得种子培养液；

(2)将步骤(1)得到的种子培养液接入发酵培养基中，26℃恒温静置培养40-45天得发酵物；

(3)将步骤(2)得到的发酵物中的发酵液和菌体分离，发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取2～4次，合并萃取液后减压浓缩得到浸膏；经色谱分离得到化合物1-3。

步骤(3)中所述色谱分离的步骤为：将浸膏经过减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯按100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100梯度洗脱，每个梯度收集两个柱体积，合并70:30和50:50梯度洗脱得到的馏分、浓缩后经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为氯仿:甲醇＝1:1，再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为CH₃OH:H₂O＝30:70至40:60，最终得到化合物1、2、3。

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其中所述洗脱剂或流动相的比例均为体积比；所述种子培养基中含有葡萄糖1.5％–3.0％、酵母膏0.1％–0.5％、蛋白胨0.1％–0.5％、粗海盐0.11％–0.6％、适量的水；所述发酵培养基中含有葡萄糖1.6％–3.5％、酵母膏0.1％–0.5％、蛋白胨0.1％–0.5％、粗海盐0.11％–0.6％、适量的水；上述百分比均为重量百分比；所述种子培养基和发酵培养基均需120℃灭25–30分钟。

本发明的另一实施方案提供一种利用上述海桑果内生真菌HSG11-9在制备抗肿瘤化合物1-3中的应用。优选针对A549肿瘤细胞。

本发明的另一实施方案提供上述化合物1-3或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明的另一实施方案提供上述化合物1-3或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物先导化合物中的应用。

本发明的另一实施方案提供上述化合物1-3或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物候选药物中的应用。

本发明提供一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于以上述化合物1-3或其药学上可接受的盐作为有效成分。