[发明专利]抗CK5/6蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种可以识别人CK5/6抗原的单克隆抗体，分泌细胞株、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。上述技术方案选取CK5/6蛋白C末端的488‑590位氨基酸为抗原肽，进行优化，成为适合在大肠杆菌BL21表达的基因片段，最后得到的重组蛋白包含TRX蛋白标签、CK5/6蛋白片段及组氨酸蛋白标签。所述重组蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗CK5/6蛋白单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株AbM58019‑7H4,以及由该细胞株所分泌的抗CK5/6蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达CK5/6蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术领域

本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗CK5/6蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用。

背景技术

细胞角蛋白(CKs)家族是一组分布于上皮细胞内的细胞骨架中间纤维丝，其表达具有组织和器官特异性，主要在上皮细胞表达，共有20余个成员。细胞角蛋白5/6(cytokeratin5/6,CK5/6)是一种高分子量的细胞角蛋白，为高分子量的酸性多肽物质，包含CK5和CK6两种分子，主要表达于上皮及粘膜的鳞状上皮，例如肺的鳞状上皮、乳腺、前列腺及唾液腺的基底肌上皮细胞层。其作用和其他细胞角蛋白一样,是维护上皮细胞的形态完整性。检测肿瘤组织的CKs表达，可用以确定该肿瘤为上皮来源或确定上皮成份有无缺失。大部分单层腺上皮不表达CK5/6，对于鳞癌和腺癌有很好的鉴别诊断作用。

在正常乳腺导管基底细胞层上CK5/6蛋白常常表达。也有研究表明，CK5/6可以作为基底细胞样型乳腺癌的特征性标志物。文献报道，表达CK5/6的乳腺癌患者的生存期是比较短的。还有研究报道，CK5/6已经被认为是乳腺癌独立的预后指标。也有文献报道在乳腺癌患者外周血中，CK5/6阳性细胞的表达与乳腺癌的分期是有关的，其可以作为临床监测和判断预后的参考性指标。目前CK5/6在分子分型中，它是已经作为基底细胞样型乳腺癌的特征性标志物了。

发明内容

发明人提供了一种抗CK5/6蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体的重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别CK5/6蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体为小鼠IgG2bκ亚型单克隆抗体。

进一步地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO 21982的杂交瘤细胞株产生。

发明人又提供了一种抗CK5/6蛋白单克隆抗体的制备方法，其用于免疫小鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达，包含TRX蛋白标签、CK5/6蛋白片段及His蛋白标签。

进一步地，所述CK5/6蛋白片段为CK5/6蛋白的488-590位氨基酸片段，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

发明人还提供了一株分泌抗CK5/6蛋白分子的杂交瘤细胞株，所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞株AbM58019-7H4，所述细胞株已于2021年3月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO 21982，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

发明人还提供了上述单克隆抗体在CK5/6蛋白免疫检测中的用途。

进一步地，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。