[发明专利]一种两色金鸡菊的新用途及分析方法

说明书

本发明提供了两色金鸡菊在制备肠道菌群调节药物方面的新用途，分析方法通过建立动物糖尿病模型，引入高通量测序技术，为后期研究两色金鸡菊治疗糖尿病的作用机制拓展新的方向和思路。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种两色金鸡菊的新用途及分析方法。

背景技术

两色金鸡菊(Coreopsis tinctoria Nutt.)又名昆仑雪菊，为菊科金鸡菊属植物的干燥头状花序，始载于《新华本草纲要》，味甘，性平，归大肠经，具有清热解毒、活血化瘀等的功效，可治疗燥热烦渴、高血压、高血糖、心慌、胃肠不适等症状。两色金鸡菊作为新疆地区临床应用广泛的维吾尔族民族药，其药用价值正在被逐渐发现。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种两色金鸡菊的新用途。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供一种用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法。

本发明采用的技术方案是：

两色金鸡菊在制备肠道菌群调节药物方面的新用途。

优选的，上述两色金鸡菊的新用途，所述肠道菌为乳杆菌属(Lactobacillus)、琥珀酸弧菌属(Succinivibrio)、密螺旋体属(Treponema)和/或未明确瘤胃菌属(unidentified-Ruminococcaceae)。

优选的，上述两色金鸡菊的新用途，所述两色金鸡菊是由下述方法制备得到的：精密称量两色金鸡菊样品50～100g于2L烧杯中，倒入1～2L沸水，盖上锡箔纸，冲泡25～35min，将茶汤滤出，继续加1～2L沸水冲泡25～35min，模拟茶叶冲泡过程，滤出茶汤，合并两次茶汤，摇匀，滤液经减压回收纯水，浓缩至稠膏状，即得两色金鸡菊浸膏。

优选的，上述两色金鸡菊的新用途，所述两色金鸡菊是由下述方法制备得到的：精密称量两色金鸡菊样品60～100g于2L烧杯中，倒入1.5～2L沸水，盖上锡箔纸，冲泡30～35min，将茶汤滤出，继续加1.5～2L沸水冲泡30～35min，模拟茶叶冲泡过程，滤出茶汤，合并两次茶汤，摇匀，滤液经减压回收纯水，浓缩至稠膏状，即得两色金鸡菊浸膏。

优选的，上述两色金鸡菊的新用途，所述减压条件为温度50～55℃，真空度0.001Mpa至0.01Mpa。

一种用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法，步骤如下：

(1)向动物模型中灌胃方式进行给药，收集动物粪便样本，提取DNA，以16S rDNA可变区引物进行PCR扩增，并对PCR产物进行混样及纯化，之后构建文库，进行上机检测；

(2)对测序数据进行处理，作OUT聚类和物种注释，比较分析肠道菌群的alpha和beta多样性。

优选的，上述用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法，所述步骤(1)采用CTAB或SDS方法对样本地基因组DNA进行提取。

优选的，上述用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法，所述步骤(1)中使用带Barcode的特异引物进行PCR。

优选的，上述用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法，所述步骤(1)中PCR产物使用2％浓度的琼脂糖凝胶进行电泳检测，对检测合格的PCR产物进行磁珠纯化，采用酶标定量，根据PCR产物浓度进行等量混样，充分混匀后使用2％的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。

优选的，上述用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法，所述步骤(1)中构建文库使用DNA PCR-Free Sample Preparation Kit建库试剂盒，构建好的文库经过Qubit和Q-PCR定量，文库合格后，使用NovaSeq6000进行上机测序。