[发明专利]常压室温等离子体诱变的沙氏芽孢杆菌及应用

说明书

本发明属于微生物领域，具体涉及常压室温等离子体诱变的沙氏芽孢杆菌及应用。申请人筛选到一株拮抗芽孢杆菌鉴定为沙氏芽孢杆菌(Bacillus shackletonii)。利用常压室温等离子体（ARTP）诱变仪对菌种进行诱变，获得一株高拮抗能力菌株Bacillus shackletonii BS156，抑制率可达92.1%，与出发菌株相比提高了12.9%，该菌株的保藏编号为CCTCC NO：M20211208，能应用于微生物肥料或生物农药领域。

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及常压室温等离子体诱变的沙氏芽孢杆菌及应用。

背景技术

十字花科根肿病是一种世界性土传病害，其致病菌目前尚无法人工培养，其分类地位尚存在争议，其休眠孢子在土壤中能存活10年以上。近年，根肿病在湖北、云南、四川、贵州、浙江、福建等省高山十字花科蔬菜种植区发生严重，已成为制约中国高山大白菜、甘蓝、萝卜反季节生产的主要因素之一，其中尤以大白菜受害最重，严重地块甚至绝收。

防治根肿病的有效方法主要包括撒石灰调节土壤pH、轮作、种植抗病品种等，但由于存在土壤板结、经济效益差、不耐储运等缺点，上述措施均未大面积推广。目前尚没有特效药能够防治大白菜根肿病，对于重症地块，常规杀菌剂如多菌灵、福美双、代森锰锌等防效不明显，市场上表现最好的是日本石原株式会社的50％氟啶胺SC与10％氰霜唑SC组合，防效能达到85％，但由于抑制种子萌发及使用成本高昂(每公顷近6 000元)等原因，也尚未得到大面积推广应用。

沙氏芽孢杆菌(Bacillus shackletonii)是一种革兰氏阳性细菌，2004年才得到分离鉴定，确定为芽孢杆菌属的一个新种，目前文献报道较少。华南理工大学刘勇等(2014)筛选到一株能快速积累聚羟基丁酸酯(polyhydroxybutyrate，PHB)的沙氏芽孢杆菌K5，并进行了发酵性能研究。中国农科院则分离到了一株能快速降解黄曲霉毒素的沙氏芽孢杆菌L7，该菌株37℃下发酵72小时后能将黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉毒素M1水平分别降低92.1％、84.1％和90.4％。目前未见该菌株在植物病原菌生物防治方面的公开报道，本发明是首次筛选了一株可抑制根肿病菌的沙氏芽孢杆菌，并且通过诱变获得了高产菌株，能应用于微生物肥料或生物农药领域。

发明内容

本发明的目的是提供一种常压室温等离子体诱变的沙氏芽孢杆菌，所述的沙氏芽孢杆菌的保藏编号为：CCTCC NO：M20211208。

本发明的另一个目的在于提供了沙氏芽孢杆菌(Bacillus shackletonii)BS156在制备抑菌剂，特别是根肿病菌(Plasmodiophora brassicae)抑菌剂中的应用。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

沙氏芽孢杆菌BS156的获得：

申请人从湖北省长阳县高山蔬菜种植地取土壤样品，从578株细菌中筛选到一株拮抗芽孢杆菌B206，对根肿病的生防潜力最大，对休眠孢子萌发的抑制率高达81.6％。通过生理生化及16S rRNA基因序列鉴定，鉴定为沙氏芽孢杆菌(Bacillus shackletonii)。利用常压室温等离子体(ARTP)诱变仪对菌种进行诱变，经过3轮筛选，获得一株高拮抗能力菌株Bacillus shackletonii BS156，抑制率可达92.1％，与出发菌株相比提高了12.9％。菌株经5代传代培养，性能稳定。该菌株于2021年9月24日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，分类命名：沙氏芽孢杆菌(Bacillus shackletonii)BS156，保藏编号为CCTCC NO：M20211208，地址：中国武汉武汉大学。

菌株BS156特征：该菌株在LB培养基上生长良好，48h形成直径3-5mm大小的圆形菌落，白色而有光泽，表面褶皱、平坦，边缘锯齿状。革兰氏染色，油镜观察，菌株BS156菌体形态为杆状，革兰氏阳性，单个、成对或链状排列，芽孢端生。