[发明专利]一种密码子优化的糖苷酶SWMU-F2-2及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 202111137767.5 | 申请日： | 2021-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN113862240B | 公开（公告）日： | 2023-04-25 |
| 发明（设计）人： | 宋璨;王瑞;方琪;雷辉;刘莉 | 申请（专利权）人： | 西南医科大学 |
| 主分类号： | C12N9/24 | 分类号： | C12N9/24;C12N15/56;C12N15/70;C12P33/20 |
| 代理公司： | 重庆市嘉允启行专利代理事务所(普通合伙) 50243 | 代理人： | 胡柯 |
| 地址： | 646000 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 密码子 优化 糖苷酶 swmu f2 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种密码子优化的糖苷酶SWMU-F2-2在水解人参皂苷Rd中的应用，其特征在于：
所述糖苷酶SWMU-F2-2的DNA序列如SEQ ID NO.1所示，其来源于粘质沙雷氏菌SGAir0764染色体基因密码子优化；
所述的一种密码子优化的糖苷酶的制备方法，具体步骤如下：
1)将密码子优化的糖苷酶基因SWMU-F2-2进行全基因合成，得到糖苷酶基因SWMU-F2-2的全长片段；
2)重组质粒的制备：将糖苷酶基因SWMU-F2-2的全长片段与载体pET-28a(+)连接，获得重组质粒pET-28a(+)/SWMU-F2-2；
3)糖苷酶SWMU-F2-2的制备：将重组质粒pET-28a(+)/SWMU-F2-2转化至E.coli BL21感受态细胞中，得到重组E.coli BL21细胞，然后加入异丙基硫代半乳糖苷IPTG进行诱导表达，得到菌液后，超声破碎菌体，离心，取上清液进一步纯化，得到糖苷酶SWMU-F2-2的酶溶液；
所述糖苷酶SWMU-F2-2的蛋白质序列如SEQ ID NO.2所示；
所述粘质沙雷氏菌SGAir 0764染色体基因密码子优化的方法为：基于基因密码的简并性，使用GeneOptimizer算法，在单次运算中考虑到了DNA序列中特定功能Motif、重复序列、GC含量、mRNA二级结构、密码子偏好性等相关优化参数，在不改变其所编码的蛋白序列的前提下，对原有基因序列进行优化，得到密码子优化的糖苷酶基因SWMU-F2-2。
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