[发明专利]一种指导卵巢癌铂耐药患者用药及疗效评估的标志物、检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种指导卵巢癌铂耐药患者用药及疗效评估的标志物、检测试剂盒及检测方法。本发明提供了一种指导卵巢癌铂耐药患者用药及疗效评估的标志物。本发明基于ctDNA突变频率对卵巢癌铂耐药患者的用药及用药疗效进行预测，表现出了更低的检测阈值，在患者CA125在正常范围值内或CT评估困难时，仍可以检出患者体内的微小残留病灶，给予临床医师一定的指导意义。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种指导卵巢癌铂耐药患者用药及疗效评估的标志物、检测试剂盒及检测方法。

背景技术

卵巢癌是世界上第二大致死性妇科癌症，其致死率在所有女性癌症中排名第八，约有75％患者诊断时已经为晚期，她们的5年生存率低于30％。目前对于晚期患者来说，治疗方法主要是手术治疗，辅助以铂类药物为基础的化疗。但经过长期反复的铂类药物治疗，几乎所有的患者都会进展为铂耐药，考虑患者对药物的耐受情况及再次选择的化疗药物所带来的毒副作用，对铂耐药后治疗方案的选择及对疗效的及时评价显得尤为重要。

对于卵巢癌患者，临床常用影像学CT检查及CA125评估病情指导治疗，CA125是临床公认的低灵敏度和特异度的检测方法。铂耐药患者一般具有手术病史，无明显可测量病灶，局限部位的CT检查不能达到全面评估病情的目的，若多部位检查CT则存在盲目性且经济成本增加等问题。

ctDNA(circulating tumorDNA)，即循环肿瘤DNA，指存在于血液、脑脊液等体液中，是游离于细胞外的肿瘤DNA。ctDNA通常和血液中来源于正常细胞的游离DNA混杂在一起，被称为cfDNA(cell free DNA)。微小残留病灶(minimal residual disease，MRD)可以被定义为患者治疗后仍然残留在体内的病灶，这些残留的微小病灶提示肿瘤细胞的持续存在，是疾病进展的主要原因，然而目前的医学影像学或分子标志物等方式无法检测到。自二代测序(next generation sequencing，NGS)成本不断降低及生物信息学分析技术的完善，基于ctDNA的液体活检技术在癌症诊治中应用逐渐成熟。

但是，目前尚没有一种及时、准确、有效的监测卵巢癌铂耐药患者体内的微小残留病灶的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种指导卵巢癌铂耐药患者用药及疗效评估的标志物，其可以及时、准确、有效的监测卵巢癌铂耐药患者体内的微小病灶，并表现出了更低的检测阈值，给予临床医师一定的指导意义。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种指导卵巢癌铂耐药患者用药及疗效评估的标志物，所述标志物包括ctDNA的突变频率。

优选的，通过Raceseq测序(见专利CN110669823A)检测ctDNA的突变频率。

本发明还提供了一种用于指导卵巢癌铂耐药患者用药及疗效评估的标志物的试剂盒，包括检测血浆样本中的ctDNA的突变频率的试剂。

本发明还进一步的提供了一种检测ctDNA的突变的方法，包括如下步骤：

(1)对肿瘤组织进行外显子测序，获得肿瘤组织标本中突变基因的信息；

(2)选取突变位点，对每个突变位点设计相应引物；

(3)提取血浆的cfDNA，进行甲基化建库，然后进行Raceseq测序；

(4)分析Raceseq测序的测序结果获得ctDNA的突变频率。