[发明专利]一种尿酸的检测方法及其应用

说明书

本发明属于生物化学技术检测领域，尤其涉及一种尿酸的检测方法及其应用。本发明将胍基杯[5]芳烃和荧光素钠制成混合溶液，将待测样品加入混合溶液中，通过荧光信号的改变来检测所述待测样品中尿酸的浓度，该方法具有高灵敏度、高选择性、快速简易的特点，能够简便、高效地检测出待测样品中的尿酸。该检测方法几乎不受尿液中其他干扰成分的影响，能够用于尿液中尿酸的检测；并可通过在紫外线(366nm)下样品的荧光变化实现尿酸的检测，从而应用于便携式、可视化的无创尿酸检测方法的开发。

技术领域

本发明属于生物化学技术检测领域，尤其涉及一种尿酸的检测方法及其应用。

背景技术

高尿酸血症是由于尿酸排泄不足或/和肾脏过载导致血清尿酸浓度过高引发的疾病。血中尿酸量过高是导致尿酸盐沉积，诱发痛风的关键风险因素。此外，高尿酸血症还与肾脏疾病、心血管疾病、糖尿病等疾病密切相关。尿酸是人体内嘌呤代谢的产物，三分之二尿酸通过尿液排出体外。在检测的体液样本中，尿液具有生物信息集成度高、样本采集无创、低生物风险性等优势，是多种代谢性疾病早期诊断的首选生物样本。

目前，尿液中尿酸的检测方法有电化学法、荧光光谱法、高效液相色谱法、液相色谱–质谱联用法等。这些方法具有较高的选择性和灵敏度，但存在样品预处理复杂、操作繁琐、检测时间长及成本高等缺点。因此，亟待开发一种快速、简便、低成本且高灵敏度的尿液中尿酸检测方法，将对高尿酸血症的早期预警具有重要意义。

发明内容

针对以上技术问题，本发明提供了一种尿酸的检测方法及其应用，基于指示剂置换(Indicator displacement assays，IDA)策略，实现了尿液中尿酸的检测，该检测方法具有高灵敏度、高选择性、快速简易的特点，能够简便、高效地检测出待测样品中的尿酸。

为解决上述技术问题，本发明第一方面提供了一种尿酸的检测方法：将胍基杯[5]芳烃和荧光素钠制成混合溶液，将待测样品加入所述混合溶液中，通过荧光信号的改变来检测所述待测样品中尿酸的浓度。

相对于现有技术而言，本发明以胍基杯[5]芳烃(GC5A)·荧光素钠(Fl)为主客体对，加入的尿酸与Fl竞争结合GC5A的空腔，将Fl从GC5A·Fl主客体络合物中置换出来，Fl恢复在溶液中的发光性能，荧光信号增敏(Switch-on)。通过荧光强度与尿酸浓度的线性关系，可实现尿酸简便、高效的检测。其中胍基杯[5]芳烃即5,11,17,23,29-五胍基-31,32,33,34,35-五(4-甲基戊烷氧基)杯[5]芳烃，为上缘胍基修饰的杯[5]芳烃。

结合第一方面，在HEPES缓冲液中检测尿酸浓度时，所述胍基杯[5]芳烃与所述荧光素钠的最终浓度分别为0.8μmol/L和1μmol/L。

本发明第二方面提供了上述检测方法在检测尿液中尿酸浓度中的应用。该检测方法几乎不受尿液中其他干扰成分的影响，能够用于尿液中尿酸的检测。

结合第二方面，用上述检测方法检测尿液中尿酸可采用以下操作：取人工尿液，离心后收集上清液，用HEPES缓冲液稀释后与含有胍基杯[5]芳烃和荧光素钠的溶液混合，逐步滴入以人工尿液为溶剂的尿酸溶液，测定荧光素钠的荧光强度，以尿酸浓度与荧光素钠的荧光强度值建立尿酸检测的线性关系，利用所述线性关系检测尿液中的尿酸浓度。

优选地，所述以人工尿液为溶剂的尿酸溶液中尿酸的浓度范围为0～50μmol/L。在该浓度范围内，尿酸浓度与荧光强度呈良好的线性关系。

优选地，所述含有胍基杯[5]芳烃和荧光素钠的溶液中，所述胍基杯[5]芳烃与所述荧光素钠的浓度分别为8μmol/L和4μmol/L。

本发明第三方面提供了上述检测方法在利用拍摄工具进行尿酸浓度检测中的应用。利用上述检测方法借助拍摄工具进行尿酸浓度检测时，可通过紫外线(366nm)照射产生的荧光变化，经色彩处理提取其G值，建立G值与尿酸浓度的线性关系，从而实现便携式、可视化的尿液中尿酸浓度的检测。