[发明专利]一种大肠埃希氏菌及其在制备免疫蛋白生物制剂中的应用

说明书

本发明属于生物技术领域，特涉及一种大肠埃希氏菌及其在制备免疫蛋白生物制剂中的应用。大肠埃希氏菌Escherichia coli已于2021年6月24日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号CGMCC No.22767。所述菌株在作为高效表达目标蛋白的宿主细胞中的应用。本发明获得菌株大肠埃希氏菌Escherichia coli,其具有遗传性状稳定，易于培养，抵抗杂菌能力强的特点；将其作为宿主细胞应用至植物免疫蛋白规模化生产，可以实现植物免疫蛋白的高效表达。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特涉及一种大肠埃希氏菌及其在制备免疫蛋白生物制剂中的应用。

背景技术

植物免疫蛋白包括来自苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白(ICP)及植物免疫蛋白类物质。从目前来看，植物免疫蛋白是已鉴定种类中最多品类最丰富的激发子类型，其中包括Nep1-like protein、RXLR蛋白家族、过敏反应诱导蛋白Hrip1、MoHrip2、Harpin等几十种免疫激活蛋白，其本身不会影响环境及环境中的非靶标有益微生物或昆虫，具有重要的应用前景。从植物病原菌中直接获取免疫蛋白非常困难，通过构建大肠杆菌、酵母菌等生物工程菌来实现批量生产是切实可行的，其中宿主细胞的特性对植物免疫蛋白的获取起到决定性作用，因此寻找并实现高产率、高活性的植物免疫蛋白的宿主细胞并且实现规模化生产是十分必要的。

五味子灰霉病主要为害五味子叶片和果实，首先在叶缘或叶尖处开始发病，逐渐扩展形成不规则形病斑，后期病斑较干脆易破裂，随着病斑扩大病斑呈灰褐色并出现灰色霉层，叶片向内卷曲。果实发病初期呈水渍状小点，向内凹陷，随着病情发展，病斑逐渐扩大，呈深褐色，皱缩，边缘明显，严重时整个果实皱缩变黑，最后产生灰色霉层；随着种植面积的扩大，病害问题日益突出，给五味子的产量和品质都带来了很大影响；因此筛选绿色、环保的药剂应用于五味子病害的防治具有十分重要的意义。

发明内容

本发明目的在于提供一种大肠埃希氏菌及其在制备植物免疫蛋白制剂中的应用。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种大肠埃希氏菌，大肠埃希氏菌Escherichia coli已于2021年6 月24日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号CGMCC No.22767。

一种大肠埃希氏菌的应用，所述菌株在作为高效表达目标蛋白的宿主细胞中的应用。

一种高效植物免疫蛋白，免疫蛋白为SEQ ID NO:1中所示的氨基酸。

Seq ID No.1所示。

MPGMSLNTSGLGASTMQISIGGAGGNNGLLGTSRQNAGLGGNSALGLGGGNQNDTVNQLAGLLT GMMMMMSMMGGGGLMGGGLGGGLGNGLGGSGGLGEGLSNALNDMLGGSLNTLGSKGGNNTTSTT NSPLDQALGINSTSQNDDSTSGTDSTSDSSDPMQQLLKMFSEIMQSLFGDGQDGTQGSSSGGKQ PTEGEQNAYKKGAGMSLNTSGLGASTMQISIGGAGGNNGLLGTSRQNAGLGGNSALGLGGGNQN DTVNQLAGLLTGMMMMMSMMGGGGLMGGGLGGGLGNGLGGSGGLGEGLSNALNDMLGGSLNTLG SKGGNNTTSTTNSPLDQALGINSTSQNDDSTSGTDSTSDSSDPMQQLLKMFSEIMQSLFGDGQD GTQGSSSGGKQPTEGEQNAYKKGA

所述的免疫蛋白由408个氨基酸组成，包含4个结构域，每个结构域包含一个稳定的α螺旋及其连接的富含酸性氨基酸的亲水性酸性单位；结构域来源相同，并且每个单独的结构域都具有引起植物过敏性坏死反应的能力；通过结构域的有序重复来实现过敏性坏死反应能力的倍数提升及植物真菌病害的有效防治。