[发明专利]一种LC-MS/MS技术测定干血斑中氧化三甲胺的方法

权利要求书

1.一种LC-MS/MS技术测定干血斑中氧化三甲胺的方法，其特征在于：具体步骤如下：

S1、采集样本：用针扎破手指，并用少量的指尖血滴于滤纸上，使用采血滤纸采集指尖血或静脉血，合格滤纸干血片需要3个血斑，每个血斑直径大于8毫米，血滴自然渗透，滤纸正反面血斑一致血斑无污染，血斑无渗血环，并在室温下进行干燥，干燥完成后将氧化三甲胺样本放入含有干燥剂的密封袋内保存备用；

S2、样本处理：利用打孔器将氧化三甲胺样本上的有血部分打下并标记为A样本，取直径为6mm的A样本，加入超纯水和除蛋白液，超声后，加入水2mL，并进行涡流30s，加入甲酸铵溶液并经常涡流混合，涡流混合后往复振荡并进行溶液离心；

S3、LC-MS/MS测定：分取上层有机相于另一试管中，40℃空气流下吹干，吸取90μL转移至密封的进样瓶后上机检测，以保留时间和质谱图定性，内标法定量，以此测氧化三甲胺。

2.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中氧化三甲胺的方法，其特征在于：所述步骤S1中，室温下干燥120-150min。

3.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中氧化三甲胺的方法，其特征在于：所述步骤S2中，加入超纯水为200-260μL，除蛋白液为10-14μL。

4.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中氧化三甲胺的方法，其特征在于：所述步骤S2中，超声条件控制在40kHz、200W，并超声15-17min。

5.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中氧化三甲胺的方法，其特征在于：所述步骤S2中，加入的甲酸铵溶液为3-5mL，并进行涡流混合1min，往复振荡10min(240次·min－1)，离心5min(3500r·min－1)。

6.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中氧化三甲胺的方法，其特征在于：所述步骤S3中，离心后将A样本溶液置于4℃中，在分离后的0h、24h和72h进行测定并对浓度变化进行测定。

7.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中氧化三甲胺的方法，其特征在于：所述除蛋白液由超纯水稀释乙腈溶液获得。

8.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中氧化三甲胺的方法，其特征在于：所述甲酸铵溶液制备方法是：称0.6306g的甲酸铵，用超纯水配成10mmol/L甲酸铵溶液，用甲酸调pH至3.0，0.45m滤膜过滤，超声脱气处理获得适用的甲酸铵溶液。

9.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中氧化三甲胺的方法，其特征在于：所述色谱条件为：色谱柱为：UltimateSiO，column(2.1mm×100mm，5Ixm，WelchMaterials，Inc)，流动相：乙腈：10mmol/L、甲酸铵(pH3.0)＝70％：30％(v/v)，等度洗脱，流速：0.4mL/min，进样量：5μL，柱温：30℃。

10.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中氧化三甲胺的方法，其特征在于：所述质谱条件：离子源为电喷雾电离源(ESI源)，喷雾电压4.2kV，离子源温度300℃，离子源气体1(N2)压力为0.3MPa，离子源气体2(N2)压力为0.3MPa，气帘气体(N2)压力为0.07MPa，碰撞气体(N2)压力为0.03MPa，正离子方式检测，去簇电压(DP)为54V，扫描方式为多反应监测(MRM)，碰撞能量(CE)为22V。