[发明专利]巴氏新小绥螨对毒死蜱抗性的分子标记及其应用和检测方法

说明书

本发明公开了一种巴氏新小绥螨对毒死蜱抗性的分子标记，所述分子标记为巴氏新小绥螨NbAkt基因和/或NbCYP3A16基因和/或NbCYP3A6基因；还公开了检测所述分子标记的引物组和试剂盒以及检测方法。本发明通过转录组测序技术和表达谱分析发掘了巴氏新小绥螨对毒死蜱抗性的分子标记，并得到了验证，该标记的特异性强、稳定性高，通过该分子标记的相对表达量分析，即可得知待测样本是对毒死蜱的敏感品系还是抗性品系，从而可以随时监测巴氏新小绥螨的抗药性，有利于“以虫杀虫”的生物防治策略，减少化学农药的使用；本发明提供了巴氏新小绥螨对毒死蜱抗性的分子标记的特异性正反向引物，还提供了优化的qPCR体系和扩增程序。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种分子标记，尤其涉及一种巴氏新小绥螨对毒死蜱抗性的分子标记及其应用和检测方法。

背景技术

巴氏新小绥螨(Neoseiulus barkeri(Hughes))属蜱螨亚纲，寄螨目，革螨亚目、植绥螨科，小新绥螨属，因其发育历期短、死亡率低、产卵率高、扩散力强的优点被认为是最好的生物防治天敌之一。巴氏新小绥螨是多食性捕食螨，除了捕食叶螨和蓟马外，还可以捕食蚜虫、木虱、粉虱、介壳虫、跳虫、跗线螨、丝状菌和蚊蝇类的幼虫等。

毒死蜱(Chlorpyrifos)属于有机磷类杀虫剂，在水稻、蔬菜和果树等经济作物上均有应用。但是毒死蜱对巴氏新小绥螨同样有较强的毒力，本实验室研究表明毒死蜱对巴氏新小绥螨的室内生物测定LC₅₀值为44.41mg/L，因此在施药过程中很容易造成巴氏新小绥螨大量死亡，化学防治与生物防治无法协调开展。

通过室内筛选获得抗药性巴氏新小绥螨，释放到果园后，巴氏新小绥螨可以有效应对农药胁迫，这对于巴氏新小绥螨的田间种群建立与害螨的综合防控具有很高的实用价值。然而从形态上很难鉴别巴氏新小绥螨对毒死蜱的敏感品系和抗性品系。

随着分子生物技术的发展及其广泛应用，分子标记被用来解决种类鉴定问题，找到巴氏新小绥螨对毒死蜱抗性的分子标记，对于区分巴氏新小绥螨敏感和抗性品系具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是针对上述问题，提供一种巴氏新小绥螨对毒死蜱抗性的分子标记及其应用和检测方法。

本发明为了实现其目的，采用的技术方案是：

一种巴氏新小绥螨对毒死蜱抗性的分子标记，所述分子标记为巴氏新小绥螨NbAkt基因和/或NbCYP3A16基因和/或NbCYP3A6基因。

所述NbAkt基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示，所述NbCYP3A16基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示，所述NbCYP3A6基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示。

一种检测上述的分子标记的引物组，包括检测巴氏新小绥螨NbAkt基因和/或NbCYP3A16基因和/或NbCYP3A6基因的引物组，

检测NbAkt基因的引物组序列为：

c38168.graph_c0-F：5’-AAAAGATAGCCGCTCAACTCG-3’，

c38168.graph_c0-R：5’-ATTTGATACGGTACACCCCTTG-3’；

检测NbCYP3A16基因的引物组序列为：

c38004.graph_c0-F：5’-ACGACGAGCCACAGAAGC-3’，

c38004.graph_c0-R：5’-TGATAAGCGAGCGGATGA-3’；

检测NbCYP3A6基因的引物组序列为：

c38045.graph_c0-F：5’-TGAAGAATAAAGCCGCAAACG-3’；