[发明专利]牛血清白蛋白修饰金纳米粒及其制备方法和佐剂应用

说明书

本发明涉及一种牛血清白蛋白修饰金纳米粒及其制备方法和佐剂应用，制备方法包括以下步骤：将氯金酸溶液回流煮沸后，加入柠檬酸盐溶液继续煮沸进行还原反应，得到金纳米粒；将牛血清白蛋白与所述金纳米粒混合并搅拌，固液分离，取固体，得到牛血清白蛋白修饰金纳米粒。本发明以牛血清白蛋白为模板对金纳米粒进行生物矿化，得到牛血清白蛋白修饰金纳米粒，可用作疫苗佐剂。与裸的金纳米粒相比，牛血清白蛋白修饰的金纳米粒分散性更好，表现出良好的稳定性，且在长达一个月的时间内没有明显的沉淀；细胞实验表明，该纳米佐剂的毒性明显低于商业油乳佐剂ISA206，体内实验表明，该纳米佐剂并可提高机体对抗原的免疫应答反应。

技术领域

本发明涉及疫苗技术领域，特别是涉及一种牛血清白蛋白修饰金纳米粒及其制备方法和佐剂应用。

背景技术

口蹄疫是猪、牛、羊等主要家畜和其它家养、野生偶蹄动物共患的一种急性、热性、高度接触性传染病，易感动物达70多种。临床特征是在口腔黏膜、蹄部和乳房皮肤发生水疱性疹。该病传播途径多、速度快，曾多次在世界范围内暴发流行，造成巨大政治、经济损失。口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种具有高度传染性的疾病，被认为是偶蹄动物最重要的疾病之一。该病发病率高，在亚洲、非洲、中东及南美地区均有流行，为国家畜牧业带来巨大的经济损失，被国际兽疫局列为A类传染病。目前接种疫苗被认为是防控口蹄疫疫情最有效的手段，现有口蹄疫疫苗多为灭活疫苗。

灭活疫苗免疫原性较差，维持的免疫时间短暂，常常需要添加佐剂以提高疫苗效力。目前应用于口蹄疫疫苗的佐剂主要为铝佐剂或油基佐剂，但这些佐剂存在毒副作用大、稳定性差、对胞内病毒感染的免疫增强作用有限的缺陷，在皮下接种后易引起肿胀或结块等不良反应，需要开发更高效、低毒的新型佐剂来解决上述问题。

纳米颗粒因具有小尺寸、高比表面积、易于修饰等特性在生物医学领域受到广泛关注，已有研究证实金纳米粒具有免疫增强作用，但由于金纳米粒的表面能较高容易团聚且毒性较大易发生溶血作用，从而限制了其在疫苗佐剂中的应用。

发明内容

基于此，有必要提供一种毒副作用较小、免疫增强作用较好的牛血清白蛋白修饰金纳米粒。

一种牛血清白蛋白修饰金纳米粒的制备方法，包括以下步骤：

将氯金酸溶液回流煮沸后，加入柠檬酸盐溶液继续煮沸进行还原反应，得到金纳米粒；

将牛血清白蛋白与所述金纳米粒混合搅拌，固液分离，取固体，得到牛血清白蛋白修饰金纳米粒。

在其中一个实施例中，所述氯金酸溶液的浓度为0.25mM～1mM，所述柠檬酸盐溶液的浓度为35mM～40mM。

在其中一个实施例中，所述氯金酸溶液中的氯金酸和所述柠檬酸盐溶液中的柠檬酸盐的摩尔比为1：(3～16)。

在其中一个实施例中，所述牛血清白蛋白与所述金纳米粒的摩尔比为(200～300):1。

在其中一个实施例中，还包括以下步骤：将所述氯金酸溶液的pH值调节至7.5～8.0，将所述柠檬酸盐溶液的pH值调节至7.5～8.0。

在其中一个实施例中，所述固液分离采用离心的方法，所述搅拌的转速为100～300rpm，所述搅拌的时间为2～3小时，所述离心的转速为7500rpm～11000rpm，所述离心的时间为5～10min。

本发明还提供了一种牛血清白蛋白修饰金纳米粒，其根据如上所述的制备方法制备得到。

本发明还提供了一种如上所述的牛血清白蛋白修饰金纳米粒作为佐剂在制备疫苗产品中的应用。

本发明还提供了一种疫苗产品，其包括抗原和如上所述的牛血清白蛋白修饰金纳米粒。

在其中一个实施例中，所述抗原为灭活口蹄疫病毒抗原，所述牛血清白蛋白修饰金纳米粒与所述抗原的质量比为1：(2～5)。