[发明专利]一种杂交瘤细胞株及其产生的抗体和应用

说明书

本发明公开了一种杂交瘤细胞株及其产生的抗体和应用，所述杂交瘤细胞株1C101E3，已依次于2021年05月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.22342。该细胞株分泌单抗腹水纯化后得到的抗体间接ELISA效价为1:11259000，所述单抗可以特异识别原核表达的重组Cry3A蛋白及转基因玉米中的内源Cry3A蛋白，分泌抗Cry3A抗虫蛋白的鼠单抗杂交瘤细胞株的构建为转基因作物中该蛋白的检测提供了物质和技术支撑。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体涉及到一种杂交瘤细胞株1C10 1E3及其 产生的抗体和应用。

背景技术

苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)是一种广泛存在的革兰氏阳性 菌，该菌分泌的抗虫晶体蛋白是目前主要的生物农药；分泌的抗虫蛋白按照 氨基酸序列相似性被分为两类：Cry和Cryδ-内毒素。其中Cry蛋白对多种 有害昆虫(如鳞翅目，双翅目，鞘翅目，线虫类和原生生物等)幼虫具有毒 性。Cry毒素已经被转入农作物使其具有抗虫性。Cry3A蛋白是Cry毒素中 的一种。目前转Cry基因的农作物主要有玉米、土豆、水稻、棉花等。

转基因技术的发展与进步推动了生物学的发展。转基因食品虽然能够满 足人们对产量、抗虫性等方面的要求，但同时也对人类的生活带来了一些潜 在的威胁，如某些基因导入宿主之后会使食品产生毒性，转基因食物产生过 敏原，使人产生抗药性，食品的营养价值发生改变等。在进行转基因食品研 究开发和商业化的同时，为了对转基因食品的安全性给予综合评估，使消费 者能够快速区分转基因食品与天然食品，建立合适的方法对转基因食品中转 基因成分进行鉴定与检测，能够促进农业转基因生物安全管理，保障人和动物以及微生物的安全，同时能够保护生态环境，促进农业转基因生物技术的 进一步研究。为了对转基因作物及其衍生物中Cry3A蛋白进行快速分析，研 究并得到抗Cry3A蛋白的单克隆抗体具有非常大的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种杂交瘤细胞株1C10 1E3及其产生的抗体和制 备方法，其分泌的单抗为实现抗虫蛋白Cry3A在转基因作物中的检测奠定基 础。

为实现上述目的，本发明提供了一种杂交瘤细胞株1C10 1E3，该杂交瘤 细胞株已于2021年05月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中心，分类命名：Cry3A单抗杂交瘤细胞株，保藏地址：北京市朝阳区 北辰西路1号院3号。邮编：100101，保藏编号为CGMCC No.22342。

该杂交瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤：

a)通过原核表达得到Cry3A重组蛋白；

b)免疫动物：将Cry3A重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠；

c)细胞融合：收集免疫BALB/c小鼠的脾细胞并与SP2/0细胞进行融合；

d)细胞建株：通过有限稀释法进行亚克隆，亚克隆5-7天进行ELISA检 测，直至筛选出稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株进行扩大再培养和保存。

上述制备方法在一种实施方式中，小鼠的脾细胞与SP2/0细胞的融合比例 为1:5-1:10。

本发明还提供了上述杂交瘤细胞株1C10 1E3所产生的单克隆抗体，杂交 瘤细胞株1C10 1E3所产生的单克隆抗体的类型为IgG2b。上述单克隆抗体通 过间接ELISA检测所得到的效价依次为1:11259000。

本发明的单克隆抗体的制备方法包括将杂交瘤细胞株1C10 1E3接种到小 鼠腹腔中制备腹水，然后进行Protein A-琼脂糖亲和层析柱纯化，得到单克隆 抗体。

本发明提供的单克隆抗体的可变区序列如下表1所示。

表1