[发明专利]一种木腐菌菌株及其筛选方法及在降解林木废弃物的应用

说明书

本发明提供了一种木腐菌菌株，鉴定为变色栓菌Trametes versicolor，菌株编号为NL1‑5，并保存在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号：CCTCC NO:M2021622，保藏日期为：2021.5.27。本发明使用木腐菌降解林木废弃物，可以加速林木废弃物的分解，降解过后的林木废弃物可用于制造微生物肥料，增强生物肥效。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，特别是涉及一种木腐菌菌株及其筛选方法及在降解林木废弃物中的应用。

背景技术

近年，我国林业、园林绿化等行业发展迅速，成效显著，但林木废弃物也随之快速增加。林木废弃物也称为林木剩余物，是指采伐、木材加工和造材利用后的剩余物，包括枯枝、落叶、枝桠、梢头、锯末、灌木、枯倒木、园林修剪物等。我国每年都会生产出大量的林木废弃物，在造成资源浪费的同时，病死木也会影响森林的健康，因此如何高效利用和处理林木废弃物成为了不得不面对的问题。

木腐菌是主要寄生于木材并促使木材发生腐朽的一类真菌，多数既可降解阔叶树，也可降解针叶树。木腐菌借助菌丝和孢子侵入木质材料中，并通过分泌多种酶破坏木质纤维的细胞壁，从而降解木质素、纤维素、半纤维素几种大分子化合物。通过研究筛选出一株可以高效降解林木废弃物的菌株，使林木废弃物可以循环利用，节约资源。

发明内容

本发明的主要目的在于，克服现有技术中的不足，提供一种木腐菌菌株及其筛选方法及在降解林木废弃物的应用。

本发明提供一种木腐菌菌株，鉴定为变色栓菌Trametes versicolor，菌株编号为NL1-5，并保存在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号：CCTCC NO:M2021622，保藏日期为2021.5.27。

本发明还提供一种筛选如前述所述的木腐菌菌株的筛选方法，包括以下步骤：

(1)菌株采集：将采集于南京林业大学北大山松木伐桩上的变色栓菌子实体，用75％的酒精喷洒于实体表面消毒，待酒精挥发后，在超净工作台中用无菌的解剖刀从菌柄中部纵向切开，在菌盖与菌柄交界处挑取小块组织，移接到无菌的PDA培养基上，将培养基放在25℃，相对湿度为40％的培养箱中避光培养3-5天，菌丝生长至平板的二分之一再移接至斜面PDA培养基，待菌丝长满斜面后，放入4℃冰箱保存；

(2)漆酶检测：将步骤(1)培养所得的菌株从冰箱取出，移接入PDA平面培养基上活化，待菌丝长至平板三分之二时，用6mm的打孔器把PDA培养基中的菌落打成菌饼，将菌饼接入PDA-愈创木酚培养基上，培养六天，观察培养基上红棕色变色圈大小；

(3)木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶检测：将步骤(1)培养所得的菌株从冰箱取出，接种于PDA-苯胺蓝培养基上，培养六天，观察培养基上产生褪色圈大小；

(4)纤维素酶检测：将步骤(1)培养所得的菌株从冰箱取出，接种于羧甲基纤维素钠培养基上，培养六天，用刚果红染色，氯化钠固定后，观察在培养基上产生透明圈大小；

(5)经步骤(2)、步骤(3)和步骤(4)检测，将均能在相应培养基中产生色圈的菌株保藏，即为木腐菌菌株，鉴定为变色栓菌Trametes versicolor，菌株编号为NL1-5。

(6)菌株鉴定：采用真菌核糖体基因组转录间隔区Internal transcribed spacer和RNA聚合酶1两对基因对菌株进行鉴定，鉴定菌株为变色栓菌Trametes versicolor，菌株编号为NL1-5。

作为优选，步骤(2)中所述PDA-愈创木酚培养基是在PDA培养基中加入终浓度0.5g/L的愈创木酚制成的。

作为优选，步骤(3)中所述的PDA-苯胺蓝培养基是在PDA培养基中加入终浓度0.1g/L的苯胺蓝制成的。