[发明专利]一种结直肠癌诊断标志物及其应用

说明书

本发明涉及分子生物学技术领域，具体是一种结直肠癌诊断标志物及其应用。本发明通过对结直肠癌患者血浆外泌体进行label‑free蛋白质谱的检测数据处理及分析，得到标准化的蛋白表达谱数据，进而筛选出差异表达的蛋白——CPS1和TNC。之后通过实验检测CPS1联合TNC在结直肠癌与癌旁组织样本以及患者血清样本中的表达差异，结果显示CPS1和TNC在结直肠癌组织中的表达水平均明显高于癌旁组织中的表达水平，且实验结果还表明其表达水平与晚期、淋巴结转移、远处转移呈正相关，可以作为结直肠癌早期筛查，预后评估指标。二者联合使用较单独其特异性、敏感度均有显著提升，具有无创、便捷等优点。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体地说，是一种结直肠癌诊断标志物及其应用。

背景技术

结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是最常见的消化道恶性肿瘤之一。据世界卫生组织国际癌症研究署估计，其发病率、死亡率约占全部恶性肿瘤的前三位。随着我国近30年经济和生活的改善，结直肠癌在我国的发病和死亡情况均呈上升趋势，位居我国恶性肿瘤发病第三位和死亡第五位，严重威胁着人们的健康和生命。结直肠癌在全球范围内具有明显的地域分布差异，高发地区主要为澳大利亚、新西兰、欧洲及北美等地区，而在非洲、中南亚等地区发病率较低。研究发现，2010年我国结直肠癌粗发病率为20.90/10万，中国人口标化率为16.14/10万；粗死亡率为10.05/10万，中国人口标化率为7.55/10万，发病率和死亡率均高于发展中国家的平均水平。大部分结直肠癌患者确诊时已处于肿瘤进展期，失去了最佳的治疗时机，导致五年生存率不到20％，预后较差。因此，探索结直肠癌快速诊断的评估方法，提高诊疗水平，提高存活率，是当前研究的热点和难点。

目前临床上用于结直肠癌诊断的方法包括：光学检查和形态学检查，常规的检查方法主要有排泄物便潜血检查、排泄物免疫学检查、钡剂双重造影检查、弹性乙状结肠镜检查、结肠镜检查和CT结肠成像。但是，上述检测方法仍存在一定局限性，如便潜血检查分离过程繁琐，易受细菌、食物及肠道粘液等干扰；结肠镜检查对设备和检测人员技术的要求较高，误诊率较大。

随着结直肠癌发病机制的研究越来越广泛，分子生物标记物在其中的重要性越来越明显。这些标记物已成为结直肠癌诊断和治疗的重要靶点。近年来，外泌体在肿瘤中的作用越来越受到重视。外泌体是由不同类型细胞分泌的直径约30-100nm的脂质双层膜囊泡。越来越多的证据表明，癌源性外泌体通过转移和交换致癌分子，包括蛋白质、脂质、核酸(circRNAs、lncRNA、microRNAs、mRNA)、转录因子等多种生物功能大分子，在肿瘤细胞间通讯中发挥关键作用，从而参与促进肿瘤发生、肿瘤增殖、转移、血管生成、免疫逃逸。研究发现经常使用的外泌体生物标志物是异质的，并且在不同细胞类型中具有特异性。许多证据证实了癌源性外泌体蛋白质的功能，这些外泌体蛋白向微环境传递细胞信号以同步表型模式。有报道称，外泌体蛋白在血液中是稳定的，有望成为临床检测的新型生物标志物。蛋白质除了发挥执行者的作用外，还具有调节免疫系统，清除病毒或微生物病原体感染，恶性肿瘤细胞的转化等重要功能。因此，我们认为外泌体蛋白可能是一类新的潜在的生物标志物或肿瘤治疗靶点。

中国专利申请：201410009149.6公开了一种结直肠癌相关的标志物的应用，该标志物为PPP1R12A。具体地讲，该标志物的DNA相对拷贝数与结直肠癌患者化疗之后的生存期呈负相关。本发明还涉及结直肠癌组织样本中检测PPP1R12A的试剂盒、方法和应用。该试剂盒中含有检测PPP1R12A和内参基因GAPDH引物对，本发明通过研究发现了PPP1R12A与结直肠癌以及结直肠癌化疗疗效之间的关系，设计出检测PPP1R12A的引物对，用该引物对设计出的试剂盒能够用于检测结直肠癌肿瘤，使通过PPP1R12A检测结直肠癌成为可能。