[发明专利]重组工程菌及其用于制备D-泛解酸的方法

说明书

本发明涉及一种D‑泛解酸的制备方法，以缬氨酸和甲醛为底物，加入重组工程菌，得到D‑泛解酸。本发明首次成功构建生物制备D‑泛解酸的基因工程菌，以缬氨酸为底物发酵转化生成D‑泛解酸，原料价廉易得，反应成本低。

技术领域

本发明涉及生物合成领域，具体涉及一种重组工程菌及其用于制备D-泛解酸的方法。

背景技术

泛酸又称维生素B₅，为包括人和家畜在内的哺乳动物的必须营养元素，并在机体细胞中用于生物合成辅酶A(CoA)和酰基载体蛋白(ACP)，进而参与一百多种细胞代谢反应。

D-泛解酸内酯是合成D-泛酸的重要前体。CN108456701A公开了一种D-泛解酸内酯的制备方法。该方法以缬氨酸为底物，通过多酶组合催化，制得D-泛解酸内酯。但存在反应步骤繁琐、反应时间长、酮泛解酸转化成泛解酸过程中的辅酶NADPH消耗带来的成本高等缺陷，限制了其产业化应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组质粒，包括：

含有L-氨基酸脱氨酶编码基因的第一重组质粒；

和/或，含有醛缩酶编码基因的第二重组质粒；

和/或，含有甲酸脱氢酶编码基因和酮泛解酸还原酶编码基因的第三重组质粒。

本发明优选的技术方案，所述L-氨基酸脱氨酶编码基因来源于奇异变形杆菌，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

本发明优选的技术方案，L-氨基酸脱氨酶编码基因经过密码子优化得到L-氨基酸脱氨酶优化基因序列。

本发明优选的技术方案，所述L-氨基酸脱氨酶优化基因序列的核苷酸序列如SEQID NO:1所示。

本发明优选的技术方案，所述L-氨基酸脱氨酶优化基因序列进行人工合成并加上酶切位点得到目的基因1。

本发明优选的技术方案，所述第一重组质粒所采用质粒为pET-28a质粒。

本发明优选的技术方案，所述醛缩酶编码基因来源于大肠杆菌，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。

本发明优选的技术方案，所述醛缩酶编码基因经过密码子优化得到醛缩酶优化基因序列。

本发明优选的技术方案，所述醛缩酶优化基因序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明优选的技术方案，所述醛缩酶优化基因序列进行人工合成并加上酶切位点得到目的基因2。

本发明优选的技术方案，所述第二重组质粒所采用质粒为pET-28a质粒。

本发明优选的技术方案，所述甲酸脱氢酶编码基因来源于伯克霍尔德氏菌，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。

本发明优选的技术方案，所述甲酸脱氢酶编码基因经过密码子优化得到甲酸脱氢酶优化基因序列。

本发明优选的技术方案，所述甲酸脱氢酶优化基因序列的核苷酸序列如SEQ IDNO:3所示。

本发明优选的技术方案，所述甲酸脱氢酶优化基因序列进行人工合成并加上酶切位点得到目的基因3。

本发明优选的技术方案，所述酮泛解酸还原酶编码基因来源于嗜麦芽窄食单胞菌，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

本发明优选的技术方案，所述酮泛解酸还原酶编码基因经过密码子优化得到酮泛解酸还原酶优化基因序列。

本发明优选的技术方案，所述酮泛解酸还原酶优化基因序列的核苷酸序列如SEQID NO:4所示。