[发明专利]一种以三角褐指藻藻细胞为模板无需提取纯化DNA的快速PCR检测方法在审
| 申请号： | 202111157252.1 | 申请日： | 2021-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN113913504A | 公开（公告）日： | 2022-01-11 |
| 发明（设计）人： | 黄炳耀;韦玉晓;唐振洲;罗小卫;刘锴;白猛;高程海 | 申请（专利权）人： | 广西中医药大学 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 天津创智睿诚知识产权代理有限公司 12251 | 代理人： | 王海滨 |
| 地址： | 530001 广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 三角 褐指藻藻 细胞 模板 无需 提取 纯化 dna 快速 pcr 检测 方法 | ||
1.一种以三角褐指藻藻细胞为模板无需提取纯化DNA的快速PCR检测方法，其特征在于，按照下述步骤进行：
步骤一：挑取藻细胞样品于离心管中，加入无菌水重悬，离心后去上清，加入磷酸缓冲液重悬备用；
步骤二：选取下述破壁方法中的一种对三角褐指藻进行破壁，释放胞内DNA到胞外缓冲液中：
破壁方法A：将重悬藻液放入液氮中，然后取出置于水浴，溶解后在涡旋振荡器震荡，重复以上过程，冷却后作为DNA模板使用；
破壁方法B：将重悬藻液放入微波炉中，使用微波中等火力模式加热4min，取出后在涡旋振荡器震荡，冷却后作为DNA模板使用；
步骤三：利用步骤二得到DNA模板进行PCR和电泳检测。
2.根据权利要求1所述的一种以三角褐指藻藻细胞为模板无需提取纯化DNA的快速PCR检测方法，其特征在于：在所述步骤二的破壁方法A中，放入液氮中的时间为1-2min，水浴的温度为40-45度，震荡的时间为10-15s，重复的次数为4-5次。
3.根据权利要求1所述的一种以三角褐指藻藻细胞为模板无需提取纯化DNA的快速PCR检测方法，其特征在于：在所述步骤二的破壁方法B中，微波加热的时间为4-5min，震荡的时间为10-15s。
4.根据权利要求1所述的一种以三角褐指藻藻细胞为模板无需提取纯化DNA的快速PCR检测方法，其特征在于：在所述步骤三中，PCR所采用的DNA聚合酶为TAKARA公司的PrimeSTAR GXL酶。
5.根据权利要求1所述的一种以三角褐指藻藻细胞为模板无需提取纯化DNA的快速PCR检测方法，其特征在于，在所述步骤三中，PCR反应体系如下：
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