[发明专利]在单管qPCR中同时检测多种肠道致病菌的组合物、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种在单管qPCR中同时检测多种肠道致病菌的组合物、试剂盒及方法，该组合物用于在单管qPCR中同时检测多种肠道致病菌。本发明可通过单管20重qPCR一次性同时检测4个菌属和5个菌种的肠道重要致病菌的共19个靶基因，检测通量大、成本低、时间短，且不需要细菌培养，适合突发腹泻疫情的应急检测。本发明的反应体系中加入了IAC内质控反应，可以有效预防假阴性结果。本发明利用qPCR方法检测的特异性好，灵敏度高，操作简便，结果也易于判读。

技术领域

本发明涉及生物检测和医学诊断技术领域，特别涉及一种在单管qPCR中同时检测多种肠道致病菌的组合物、试剂盒及方法。

背景技术

肠道重要致病菌主要有金黄色葡萄球菌、艰难梭菌、小肠结肠炎耶尔森菌、单细胞增生李斯特菌、致泻大肠埃希氏菌，以及沙门氏菌属、志贺氏菌属、弧菌属、弯曲杆菌属中的多数菌种等。

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是临床院内感染最常见且最重要的一种革兰阳性菌，感染后会导致恶心、呕吐、腹泻等症状，特别是会给免疫力低下的人带来严重的健康问题。医院内金黄色葡萄球菌耐药情况也非常严重。

艰难梭菌(Clostridium difficile)为革兰阳性厌氧杆菌，可产生两种毒素：肠毒素和细胞毒素，导致肠道大量失水和出血性坏死。其引起的抗生素相关性结肠炎，是院内获得性腹泻最常见的原因；15％～25％的抗生素相关性腹泻由艰难梭菌引发。

小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)属于肠杆菌科耶尔森菌属，是一种人兽共患的肠道病原菌，是人类耶尔森氏病的主要原因，是全球范围内最重要的食源性病原菌之一。

单细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)由于致死率高，在欧盟李氏菌病被认为是最严重的食源性疾病之一。由于宿主对本菌的清除主要依靠细胞免疫功能，因此老年人、孕妇、新生儿及免疫力低下的人群易感。

致泻大肠埃希氏菌(Escherichia coli)根据致病性的不同主要包括产肠毒素性大肠埃希氏菌(enterotoxigenic E.coli，ETEC)、肠道侵袭性大肠埃希氏菌(enteroinvasive E.coli，EIEC)、肠道致病性大肠埃希氏菌(enteropathogenic E.coli，EPEC)、肠集聚性黏附性大肠埃希氏菌(enteroaggregative E.coli，EAEC)和肠出血性大肠埃希氏菌(enterohemorrhagic E.coli，EHEC)5种。ETEC是发达国家旅行者腹泻的主要病原菌之一，也是小儿腹泻的重要病原菌，其发病率仅次于轮状病毒。EIEC临床表现类似菌痢，主要侵犯儿童和成人。EPEC是婴幼儿流行性腹泻的重要病原菌，在医院中常引起暴发流行。EAEC引起的成年人中毒症状表现为中度腹泻，病程1～2天；婴幼儿多表现为2周以上的持续性腹泻。EHEC因能引起人类的出血性肠炎而得名，主要致病菌株为O157：H7；人群普遍易感，但以老人儿童为主。

沙门氏菌属(Salmonella)属于革兰氏阴性肠道杆菌，其多个菌种都是常见的食源性致病菌，如鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)、肠炎沙门菌(Salmonellaenteritidis)、伤寒沙门菌(Salmonella typhi)等。感染沙门氏菌的人或带菌者的粪便污染的食品，可使人发生食物中毒。据统计在世界各国的各类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。我国内陆地区也以沙门氏菌为首位。

志贺氏菌属(Shigella)的多个菌种均是人类细菌性痢疾的病原菌，如福氏志贺菌(Shigella flexneri)、宋内志贺菌(Shigella sonnei)、痢疾志贺菌(Shigelladysentery)鲍氏志贺菌(Shigella bogdii)。在全球范围内，每年大约有1.647亿痢疾病例，导致110万人死亡。志贺菌属细菌感染长期以来一直是，并将继续是世界范围内重要的公共卫生问题。