[发明专利]一种抑制PCSK9靶基因表达的核酸序列及其应用

说明书

本发明涉及一种抑制PCSK9基因表达的siRNA，其正义链核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反义链核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，且发现上述正、反义链核苷酸序列分别经取代、缺失和/或添加1～6个碱基而形成的新的核苷酸序列经退火生成的siRNA采用多种化学修饰方法进行结构改造后，对基因PCSK9的表达都具有很好的抑制活性。通过对上述siRNA进行配体修饰，形成新的缀合物，在保持了较高的抑制活性和稳定性的同时，还具有较好的肝靶向性和促进细胞内吞的能力，并且其还具有优异的亲和力，为未来靶向治疗提供了可能。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别是涉及一种抑制PCSK9靶基因表达的核酸序列及其应用。

背景技术

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(Proprotein convertase subtilisin/kexin type9,PCSK9)是属于Ca²⁺依赖的丝氨酸内切酶，PCSK9可以通过细胞外及细胞内途径与低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor，LDLR)结合，促进LDLR的降解；细胞外途径也是发挥作用的主要方式，分泌至细胞外的PCSK9通过与细胞膜上的LDLR结合，使得LDLR被内吞形成内体，最终进入溶酶体而被降解；在细胞内途径中从高尔基体分泌出的PCSK9进入细胞质，直接与LDLR结合，使LDLR在细胞内直接进入溶酶体降解途径。由于LDLR是组织尤其是肝脏摄取循环中胆固醇的重要方式，因此PCSK9的含量增加引起的LDLR降解会导致循环中胆固醇含量的升高，这使得PCSK9成为降低血胆固醇的重要靶点。

并且，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)升高是心血管疾病主要的危险因素，PCSK9抑制剂具有强大的降低LDL-C作用，是极具前景的新型降脂药物。靶向PCSK9的siRNA药物从mRNA层面上阻断PCSK9蛋白功能，降低血液中的LDL-C水平，比传统药物具有特异性好、易于设计、低毒性、不产生耐药性等特点。

siRNA作为一种新的治疗方法具有巨大的发展潜力，siRNA作用于细胞内的mRNA,相对于传统的小分子药物，它能够直接沉默靶基因，因此可以从根本上更高效地组织疾病的发生和发展，但由于siRNA稳定性较差，在体内容易被核酸酶降解，不易被组织吸收，难以被细胞摄取，易产生脱靶效应等缺陷，使得其在临床应用上受到局限。对siRNA进行恰当的修饰能够增加siRNA的稳定性，同时有效抑制目的基因的表达。

发明内容

基于此，本发明的目的之一在于提供一种抑制或降低PCSK9靶基因表达的siRNA。

包括如下技术方案：

一种抑制或降低PCSK9靶基因表达的siRNA，其由互补的正义链和反义链组成；所述正义链的碱基组成序列选自SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2，并且，所述正义链从5′末端起第1个碱基和从3′末端起第1-2个连续碱基均进行2′-O-甲基修饰；所述反义链的碱基组成序列选自SEQ ID NO.3-SEQ ID NO.9。

本发明的目的之一还在于提供一种药物组合物。

包括如下技术方案：

一种药物组合物，其有效成分包括上述抑制或降低PCSK9靶基因表达的siRNA。

本发明的目的之一还在于提供上述药物组合物在预防或缓解或治疗由PCSK9靶基因表达引起的疾病中的应用。

本发明的目的之一还在于提供一种抑制或降低PCSK9靶基因表达的方法。

包括如下技术方案：

一种抑制或降低PCSK9靶基因表达的方法，其为引入上述抑制或降低PCSK9靶基因表达的siRNA、和/或上述药物组合物。