[发明专利]一种基于吩噻嗪可逆荧光探针的设计合成及性质研究

权利要求书

1.一种基于吩噻嗪可逆荧光探针的合成及性质研究，其特征在于，所述的荧光分子探针的化学结构式如下所示：。

2.如权利要求1所述的一种基于吩噻嗪可逆荧光探针的合成，其特征在于，所述荧光分子探针的制备方法包括以下步骤：步骤1为化合物10-乙基-10 H-吩噻嗪的制备:将吩噻嗪加入DMSO中，向体系内加入适量氢化钠混合搅拌0.5小时，再将与吩噻嗪同摩尔比的溴乙烷加入体系内，氮气保护室温下反应24小时，待反应结束后萃取干燥，除去溶剂，柱层析得到目标物；步骤2为化合物10-乙基-10 H-吩噻嗪-3-甲醛的制备：将适量10-乙基-10 H-吩噻嗪溶于1，2-二氯乙烷，向体系滴加入Vilsmeier-Haack试剂，氮气保护搅拌回流12小时，反应结束后加入蒸馏水使其淬灭，调节pH至中性，萃取干燥，除去溶剂，柱层析得到目标物；步骤3探针(E)-2-氰基-3-(10-乙基-10 H-吩噻嗪-3-基)-N，n-二甲基丙烯酰胺的制备：将适量10-乙基-10 H-吩噻嗪-3-甲醛溶于乙醇，加入同摩尔比的2-氰基-N，N-二甲基乙酰胺，加入哌啶，氮气保护搅拌回流8小时，待反应结束后萃取干燥，除去溶剂，柱层析得到目标物。

3.如权利要求1所述的一种基于吩噻嗪可逆荧光探针的应用，其特征在于，对Cys、Hcy、GSH的区分方法如下：含有1% DMSO的PBS（pH=7.4）缓冲溶液中探针（10 μM）对Cys (200 μM)、Hcy (15 μM)和GSH (5 mM)响应35 min后，从紫外吸收光谱中可以看出探针对Cys和Hcy几乎无明显变化，而对GSH有很明显的响应，波长为310 nm和435 nm处的峰有明显的下降；探针与GSH反应后，探针的荧光强度发生了明显的下降，而探针对Cys和Hcy几乎无明显变化。

4.如权利要求1所述的一种基于吩噻嗪可逆荧光探针的应用，其特征在于，探针与GSH的滴定及检测线测定如下：在GSH浓度范围0-10 mM内，监测探针（10 µM）与GSH在（1-10 mM）在 PBS (pH 7.4，1% DMSO)中反应后606 nm处的荧光强度；随着GSH浓度的增加，在606 nm处发射峰的荧光强度也随之减弱；根据测试结果，将探针与GSH浓度(0-5 mM)进行线性拟合，发现在GSH的浓度小于5 mM时，荧光强度与GSH浓度呈线性关系，直线方程为y=-147.11x+764.89；当GSH浓度达到5mM之后，荧光强度保持在相对稳定的范围内，几乎没有荧光强度变化，并计算出其对GSH的最低检测极限为1.07 μM（细胞中GSH为0-10 mM）。