[发明专利]一种长茎葡萄蕨藻多糖的提取方法

说明书

本发明公开了一种长茎葡萄蕨藻多糖的提取方法，其先依次用海水和蒸馏水清洗长茎葡萄蕨藻，然后干燥、粉碎得到长茎葡萄蕨藻粉末；接着将长茎葡萄蕨藻粉末加入超纯水和木瓜蛋白酶后提取2～4h，再在沸水水浴的条件下灭酶，然后离心分离得到上清液和藻渣；将上清液负压浓缩后加入乙醇进行醇沉，再离心弃去上层乙醇，得到沉淀A；同时藻渣按照相同步骤进行提取得到沉淀B，将沉淀A和沉淀B合并后完全溶解在超纯水中，再进行冷冻干燥即可得到长茎葡萄蕨藻多糖。本发明方法可以提高长茎葡萄蕨藻多糖的提取率，具有易制备、低成本、无污染、高得率等优点。

技术领域

本发明属于长茎葡萄蕨藻多糖提取技术领域，具体涉及一种长茎葡萄蕨藻多糖的提取方法。

背景技术

长茎葡萄蕨藻为绿藻的一属, 俗称海葡萄（学名：Caulerpa lentillifera）原生于琉球，它的直立枝外形类似葡萄，其藻体可分为匍匐茎、直立枝和丝状假根三部分，球形小枝布满整个直立枝主轴。整个藻体为一个多核细胞，虽然有多数细胞核存在但彼此之间没有细胞壁相隔。长茎葡萄蕨藻是一种营养丰富的食用绿藻，含人体所需的多种氨基酸、多糖与维生素，ω-6脂肪酸如油酸，花生四烯酸等，长茎葡萄蕨藻中的必需氨基酸/非必需氨基酸（EAA/NEAA）为54.36%～69.75%，必需氨基酸/总氨基酸（EAA/TAA）为35.22%～48.19%，总酚含量2.04mg/g，黄酮类化合物含量4.93mg/g，维生素E0.22mg/kg～0.31mg/kg，维生素C3.47mg/kg～5.03mg/kg，粗纤维1.91%～12.98%，粗脂肪0.81%～4.40%，蛋白9.22%～19.38%，灰分含量24.00%～56.08%；长茎葡萄蕨藻多糖主要为硫酸多糖，其含量为34.00%～64.97%，单糖组成中，甘露糖、半乳糖和木糖的含量最高，分别为28.38%～48.26%、28.47%～49.93%和13.32%～59.8%。研究表明，长茎葡萄蕨藻多糖具有α-葡萄糖苷酶抑制作用和抗氧化作用，还具有免疫调节作用，长茎葡萄蕨藻对巨噬细胞有免疫刺激活性，具有广泛的应用价值和前景。然而，目前分离提取长茎葡萄蕨藻多糖时，采用水提醇沉法和碱提法的提取方法，其存在多糖得率低、成本高、制备流程复杂等问题，以至于生产效率低、产品品质差，阻碍了长茎葡萄蕨藻多糖的应用和推广。

发明内容

针对上述不足，本发明公开了一种长茎葡萄蕨藻多糖的提取方法，提高长茎葡萄蕨藻多糖的提取率，具有易制备、低成本、无污染、高得率等优点。

本发明是采用如下技术方案实现的：

一种长茎葡萄蕨藻多糖的提取方法，其包括以下步骤：

（1）用海水清洗长茎葡萄蕨藻，然后再用蒸馏水洗涤3次，接着置于烘箱中在50℃下干燥，然后粉碎过50目筛得到长茎葡萄蕨藻粉末，将长茎葡萄蕨藻粉末干燥保存备用；

（2）取长茎葡萄蕨藻粉末加入超纯水均匀混合得到混合液A，所述长茎葡萄蕨藻粉末的质量与超纯水的体积的比为1g:（40～50）ml，然后调节混合液A的pH为6，并且加入木瓜蛋白酶，再在40～60℃下提取2～4h得到混合液B，所述木瓜蛋白酶的加入量为混合液A质量的1～2.5%；

（3）将经过步骤（2）得到的混合液B在沸水水浴的条件下灭酶5min，然后在离心力为3500xg的条件下离心15min后分离得到上清液和藻渣；将上清液置于旋转蒸发器中，在50℃条件下负压浓缩至浓度为1g/ml，得到浓缩提取液，浓缩提取液自然冷却至室温后加入体积分数为95%的乙醇得到混合液C，所述乙醇的加入体积为浓缩提取液体积的5倍；将混合液C置于4℃下醇沉12h，然后在离心力为3500xg的条件下离心15min后弃去上层乙醇，收集得到沉淀A；

（4）将步骤（3）中得到的藻渣依次按照步骤（2）和步骤（3）进行提取得到沉淀B，将沉淀A和沉淀B合并后完全溶解在超纯水中得到混合液D，将混合液D冷冻干燥36h后，即得到长茎葡萄蕨藻多糖。

进一步的，在步骤（2）中，通过向所述混合液A中加入质量浓度为10%的盐酸或质量浓度为5%的氢氧化钠溶液调节pH至6。