[发明专利]表达载体元件组合、新的生产用细胞产生方法及其在重组产生多肽中的用途

权利要求书

1.用于选择重组瞬时转染哺乳动物细胞的方法，其包括以下步骤：

a)用包含以下的表达载体转染哺乳动物细胞：

-按5’至3’方向包含hEF1α启动子、编码抗体轻链的核酸和bGH polyA信号序列的第一表达盒；

-按5’至3’方向包含hEF1α启动子、编码抗体重链的核酸和bGH polyA信号序列的第二表达盒；和

所述第一表达盒和所述第二表达盒双向排列用于选择瞬时转染的细胞，

从而获得大量重组哺乳动物细胞；

b)从所述大量重组哺乳动物细胞选择(单个)瞬时转染的重组哺乳动物细胞。

2.权利要求1的方法，其特征在于所述编码抗体轻链的核酸和/或所述编码抗体重链的核酸包含至少一个内含子。

3.权利要求1或2的方法，其特征在于所述编码抗体轻链的核酸和/或所述编码抗体重链的核酸是cDNA。

4.权利要求1至3中任一项的方法，其特征在于所述表达质粒进一步包含选择标记。

5.权利要求1至4中任一项的方法，其特征在于所述表达盒按LC-HC-SM顺序排列。

6.权利要求1至5中任一项的方法，其特征在于所述人延伸因子1α启动子含有内含子A。

7.权利要求1至6中任一项的方法，其特征在于所述表达载体不含任何转录终止子序列。

8.权利要求7的方法，其特征在于所述终止子序列是hGT序列。

9.权利要求1至8中任一项的方法，其特征在于所述哺乳动物细胞选自CHO细胞、HEK细胞、BHK细胞、NS0细胞和SP2/0细胞。

10.权利要求9的方法，其特征在于所述哺乳动物细胞是用于选择瞬时转染的细胞的HEK细胞。

11.用于产生抗体的方法，其包括以下步骤：

a)培养包含以下瞬时转染的哺乳动物细胞：

-按5’至3’方向包含hEF1α启动子、编码抗体轻链的核酸和bGH polyA信号序列的第一表达盒；

-按5’至3’方向包含hEF1α启动子、编码抗体重链的核酸和bGH polyA信号序列的第二表达盒；和

所述第一表达盒和所述第二表达盒双向排列用于选择瞬时转染的细胞，

b)从所述瞬时转染的细胞或培养基回收所述抗体。

12.权利要求11的方法，其特征在于所述编码抗体轻链的核酸和/或所述编码抗体重链的核酸包含至少一个内含子。

13.权利要求11或12的方法，其特征在于所述编码抗体轻链的核酸和/或所述编码抗体重链的核酸是cDNA。

14.权利要求11至13中任一项的方法，其特征在于所述表达质粒进一步包含选择标记。

15.权利要求11至14中任一项的方法，其特征在于所述表达盒按LC-HC-SM顺序排列。

16.权利要求11至15中任一项的方法，其特征在于所述人延伸因子1α启动子含有内含子A。

17.权利要求11至16中任一项的方法，其特征在于所述表达载体不含任何转录终止子序列。

18.权利要求17的方法，其特征在于所述终止子序列是hGT序列。

19.权利要求11至18中任一项的方法，其特征在于所述哺乳动物细胞选自CHO细胞、HEK细胞、BHK细胞、NS0细胞和SP2/0细胞。