[发明专利]一种采用普鲁士蓝纳米酶的干式葡萄糖试纸条及其制备方法

说明书

本发明公开了一种采用普鲁士蓝纳米酶的干式葡萄糖试纸条及其制备方法，属于临床诊断技术领域。本发明采用普鲁士蓝纳米酶替代干化学试纸条中普遍使用的天然辣根过氧化物酶。人工合成的普鲁士蓝纳米材料具有催化过氧化物与底物反应的特性。相较天然酶，人工酶具有易储存、制备方便、可工业化大批量生产，成本低、热稳定性好等优势，能满足临床应用的需求。

技术领域

本发明涉及一种采用普鲁士蓝纳米酶的干式葡萄糖试纸条，属于临床诊断技术领域。

背景技术

临床大多数常规生化物质在设定的一系列酶催化反应后都会产生过氧化氢，从而可以在过氧化物酶的作用下与底物发生显色反应，对相应的浓度指标完成定量测试。在急诊科或者床旁诊断时，对样本的取样量，分析过程操作的简便性与测试结果的报告时间有较高的要求。把参与生化反应的物质干燥在层层叠加的膜上的干化学法，可以满足指尖血检测，操作简便，3分钟以内得出结果，适用于急诊科与床旁诊断领域。

相较于传统得湿式法，干法试纸在制备时需要配置浓度更好得酶溶液使之有效地固定在膜表面以达到相应的工作要求。过氧化物酶是干化学试纸条中应用最广泛、消耗量最大的酶。工业生产辣根过氧化物酶通常以天然辣根为原料，经水抽提后再经硫酸铵第一次分级、磷酸钙凝胶纯化、再由乙醇分级、硫酸铵第二次分级、结晶精制得产品。天然辣根过氧化物酶存在如下缺陷：(1)价格昂贵，辣根过氧化物酶市场用量巨大，依赖进口，货期长，储存条件严格，物流成本高；(2)酶催化活性批间差大；(3)酶的蛋白质结构热稳定性差，试剂条在烘干过程中可能导致酶性能的降低，对试剂条的加工工艺要求苛刻。

因此，亟需提供一种不使用天然辣根过氧化物酶的干式葡萄糖试纸条。

发明内容

发明目的：本发明要解决的技术问题是提供一种采用普鲁士蓝纳米粒子替代天然辣根过氧化物酶的干式葡萄糖试纸条，以解决现有技术中使用辣根过氧化物酶的干式葡萄糖试纸条热稳定性差、价格昂贵、制备条件苛刻的问题。

本发明还要解决的技术问题是提供上述采用普鲁士蓝纳米酶的干式葡萄糖试纸条的制备方法。

技术方案：为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种采用普鲁士蓝纳米酶的干式葡萄糖试纸条的制备方法，包括如下步骤：

(1)将普鲁士蓝纳米酶、黏附剂、成膜材料、葡萄糖氧化酶、过氧化物底物加入缓冲液中，制备成膜处理液(Ⅰ)，使膜处理液(Ⅰ)吸附在反应膜上，烘干，得到含有普鲁士蓝纳米酶的反应膜；

或者将普鲁士蓝纳米酶、黏附剂、成膜材料加入缓冲液中，制备成膜处理液(Ⅱ)，使膜处理液(Ⅱ)吸附在滤血膜上；然后将葡萄糖氧化酶、过氧化物底物、黏附剂、成膜材料加入缓冲液中，制备成膜处理液(Ⅲ)，使膜处理液(Ⅲ)吸附在反应膜上；

(3)将扩散膜、滤血膜、反应膜由上至下依次叠加，得到采用普鲁士蓝纳米酶的干式葡萄糖试纸条；

其中，膜处理液与膜的结合方式可以为浸泡，也可以采用划线仪划线；用浸泡方式处理的膜可置于45℃烘箱中干燥2h，用划线方式处理的膜可置于37℃干燥1h。

步骤(1)中，所述普鲁士蓝纳米酶的制备方法如下：

(S1)将PVP、FeCl₃·6H₂O分散于超纯水中，在60℃水浴加热搅拌混合，所述PVP、FeCl₃·6H₂O的摩尔比为10:0.05-10:0.15，所述PVP在超纯水中的含量为0.100-0.125mmol/mL；

(S2)将K₄[Fe(CN)₆]·3H₂O按0.003-0.006ml/mL分散于超纯水中，