[发明专利]马鹿miR PC-2869的前体及其应用

说明书

马鹿miR PC‑2869的前体及其应用，它涉及一种小RNA(microRNA)的前体，本发明提供了能够产生东北马鹿(Cervus elaphus)鹿茸成熟miR PC‑2869并对细胞起抑制作用的因子，其命名为：cel‑mir PC‑2869，其序列为GTCCTTCCTGAGCCACTTTCTGTGGAGACCTAGTGCATTCCAAAAAGCCGACGCATTGGTGGTTCAGTGGTAGAATTCTC，具有高效下调CDK8蛋白表达的作用，可抑制细胞增殖。

技术领域

本发明涉及一种小RNA(microRNA)的前体，能够产生成熟miR PC-2869，负调控细胞的增殖。

背景技术

microRNA(简称miRNA)是一类长19-24bp，具有调节功能的、保守的、单链非编码RNA，能够识别并结合mRNA上的配对区域，从而抑制mRNA的翻译或者促进mRNA的降解，负调控基因的表达。miRNA转录过程一般在RNA聚合酶Ⅱ的参与下完成，并且转录产物会经过加帽和多聚腺苷酸化的修饰，形成初始miRNA，即pri-miRNA，典型的动物 pri-miRNA由不完全配对的茎，终端环，以及侧翼序列这三部分组成。miRNA的生成要经过两次序列加工，第一次加工发生在细胞核中，Drosha酶对pri-miRNA的侧翼序列进行剪切，从而生成前体miRNA，即pre-miRNA。动物细胞中，pre-miRNA在exportin 5和RNA-GTP 的共同作用下从细胞核进入细胞质，开始第二次的加工过程。细胞质中典型Dicer酶参与剪切反应，Dicer酶会对pre-miRNA的两端进行识别，从而完成对茎和环的第二次剪切，这种剪切可能会产生1-2个不同的成熟miRNA，每个来自于一条茎结构的臂(-3p和-5p)。

microRNA PC-3p-2869(简称miR PC-2869)是一种在马鹿(Cervus elaphus)鹿茸软骨中表达的miRNA，能够负调控多种靶标基因，包括EEF1A1、CDK8等基因。其中CDK8是细胞周期依赖性激酶(Cyclin-dependent kinase，CDK)家族的成员，属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。大多数CDK蛋白参与细胞周期调控，部分参与转录调控，极少数参与其他功能。CDK8 蛋白主要参与转录调控，能够和cyclin C、MED12、MED13形成介质复合体，介质复合物为转录因子、染色质修饰子、启动子、增强子和RNA聚合酶II(RNA Pol II)建立桥梁，并在转录过程中发挥核心作用。CDK8能够参与调控WNT/β-catenin、JAK-STAT、TGFβ/BMP、 Notch等信号通路，从而影响细胞的生理和一些疾病的病理过程。有研究表明抑制CDK8的表达会降低大肠癌细胞的增殖并减少从G1期进入S期的细胞数量。miR PC-2869能够抑制细胞的增殖、迁移、侵袭，不仅在鹿茸快速生长过程中具有重要的调控作用，而且在癌症治疗方面也具有应用的潜能。

目前能够在细胞内实现miRNA过表达的方式有很多种，包括使用miRNA mimics、miRNA agomiR等。一种有效的方式是获取表达miRNA的前体序列，模拟细胞内miRNA的生成和加工剪切过程，从而实现细胞内miRNA的过表达。

发明内容

本发明确定了马鹿来源的、能表达产生马鹿成熟miR PC-2869的前体，该前体成熟产物能负调控CDK8基因表达，并抑制细胞增殖。同时确定了该前体的名称和序列。本发明根据欧洲马鹿(Cervus elaphus hippelaphus)基因组以及东北马鹿(Cervus elaphusxanthopygus) 软骨组织的miRNA表达数据，生物信息学预测得到了miR PC-2869前体序列，将其命名为 cel-mir PC-2869。其长度为80nt，能够形成稳定、典型的茎-环结构(图1所示)，序列如Seq ID NO：1所示(GTCCTTCCTGAGCCACTTTCTGTGGAGACCTAGTGCATTCCAAAAAGCCGACGCATTGGTGGTTCAGTGGTAGAATTCTC)。