[发明专利]热稳定的逆转录酶突变体

权利要求书

1.逆转录酶突变体，其氨基酸序列选自SEQ ID NO：2、 SEQ ID NO：3以及SEQ ID NO：5中的任一种。

2.根据权利要求1所述的逆转录酶突变体，其包含标签。

3.根据权利要求2所述的逆转录酶突变体，所述标签融合于所述逆转录酶突变体的C端。

4.根据权利要求3所述的逆转录酶突变体，所述标签为Arg标签、His标签、Strep标签、Flag标签、T7标签、V5-肽标签、GST标签和c-Myc标签中的任一种。

5.分离的核酸，其编码权利要求1~4任一项所述的逆转录酶突变体。

6.包含权利要求5所述核酸的载体。

7.宿主细胞，其基因组中掺有权利要求5所述的核酸，或被权利要求6所述的载体所转化。

8.生产逆转录酶突变体的方法，包括：

a) 培养权利要求7所述的宿主细胞；

b) 表达所述逆转录酶突变体；并

c) 由所述宿主细胞分离所述逆转录酶突变体。

9.试剂盒，其包含权利要求1~4任一项所述的逆转录酶突变体。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其还包含RNA提取试剂、逆转录反应液、dNTPs、水、双脱氧核苷酸以及逆转录引物中的一种或多种。

11.组合物，其由权利要求9或10所述的试剂盒中的各成分混合得到。

12.用于逆转录一种或多种核酸分子的方法，包括：

i) 使用权利要求1~4任一项所述的逆转录酶突变体与模板RNA接触，并且

ii) 在足以生产与所述模板RNA互补的DNA的反应体系下保温。

13.用于检测样品中RNA标记物的方法，包括：

i) 使用权利要求1~4任一项所述的逆转录酶突变体与RNA标记物接触；

ii) 在足以生产与所述RNA标记物互补的DNA的反应体系下保温；和

iii) 检测步骤ii）中合成的DNA的存在，从而检测所述样品中的RNA标记物；

所述方法为非疾病诊断目的。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述样品选自临床样本。

15.根据权利要求13所述的方法，其中所述样品选自血液、血浆、血清、尿、胆汁、脑脊髓液、拭子、器官样品。

16.根据权利要求13所述的方法，所述样品得自细胞培养物、怀疑被污染的来源或受试者。

17.根据权利要求16所述的方法，所述受试者选自人或动物。

18.根据权利要求12~17任一项所述的方法，所述保温的温度为30℃~70℃。

19.根据权利要求18所述的方法，所述保温的温度为65℃~70℃。

20.用于逆转录一种或多种核酸分子的方法，包括：

i) 使用氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的逆转录酶突变体与模板RNA接触，并且

ii) 在足以生产与所述模板RNA互补的DNA的反应体系下保温；所述保温的温度为30℃~70℃。

21.用于检测样品中RNA标记物的方法，包括：

i) 使用氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的逆转录酶突变体与RNA标记物接触；

ii) 在足以生产与所述RNA标记物互补的DNA的反应体系下保温，所述保温的温度为30℃~70℃；和

iii) 检测步骤ii）中合成的DNA的存在，从而检测所述样品中的RNA标记物；

所述方法为非疾病诊断目的。