[发明专利]一种新型IRE1a抑制剂紫草素及与双硫仑协同抗肿瘤组合方式

说明书

本发明提供了新型IRE1a核酸酶抑制剂紫草素以及紫草素与戒酒药双硫仑协同抗肿瘤的组合方式。紫草素新作用靶点的发现，表明紫草素可用于治疗与IRE1a通路相关的疾病并且可用作单一药剂或用于组合治疗中。紫草素与具有广谱抗肿瘤前景的药物双硫仑协同抗肿瘤作用的发现，则为其后续药物开发提供了一种药物组合方式。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及IRE1a抑制剂、其与双硫仑组合方式及其相应治疗用途。

背景技术

细胞内质网中的蛋白质折叠应激会引发未折叠蛋白质应答。IRE1a是未折叠蛋白质应答中的关键蛋白，它具有激酶和核酸酶双重活性，能以其特有的方式激活XBP1u信使RNA剪接成XBP1s信使RNA，以减轻蛋白质折叠应激，因而保护细胞免遭应激诱导的凋亡，并促进肿瘤生长与血管生成。IRE1a抑制剂可用于治疗自身免疫疾病、糖尿病、肿瘤和微生物感染等。目前已经有一些IRE1a抑制剂被发现，根据其结合位点分为三种类型：(1)激酶口袋结合物；(2)核酸酶结构域结合物；(3)未证实结合位点的抑制剂。激酶口袋结合物是一类占据IRE1a激酶ATP结合位点的配体，在内质网应激下抑制核酸酶介导的XBP1信使RNA剪接；以4μ8C为代表的核酸酶结构域结合物都具有一个共同的羟基芳基醛基团，该基团与核酸酶结构域的特定赖氨酸(Lys907)发生选择性反应，通过席夫碱形成稳定的亚胺，有效防止XBP1信使RNA剪接。其他抑制剂，如丰加霉素、阿霉素、trierixin和quinotrierixin，在体内和体外均显示抑制IRE1a-XBP1通路，但没有明确的作用模式。目前，尚无IRE1a抑制剂类药物获批上市，该类抑制剂仍处于开发早期，尚无可供分析的临床数据，IRE1a抑制剂需持续关注。

紫草素是中药紫草的一种主要活性成分，具有抗癌、抗炎、抗菌等作用，临床上可用于治疗急、慢性肝炎、银屑病、角膜炎、湿疹、阴道炎、子宫颈炎、治疗烧伤和促进伤口愈合等。但是其作用机制、作用靶点尚不十分明确。Duan,D.等报道紫草素抗癌机制可能是其能诱导细胞线粒体内ROS生成，从而导致癌细胞凋亡及死亡。目前尚未有紫草素抑制IRE1a-XBP1通路的报道。

戒酒药双硫仑近些年被发现具有广谱的抗肿瘤作用，2017年《自然》杂志弄清楚了其活性代谢物及作用靶点。双硫仑的活性代谢物能结合NPL4并诱导其聚集，从而使重要的p97通路失效，诱导复杂的细胞表型导致细胞死亡。p97通路失效会诱导包括IRE1a-XBP1在内的未折叠蛋白质应答，从而减轻蛋白质折叠应激，保护细胞免遭应激诱导的凋亡。因此，通过使用紫草素抑制IRE1a，与双硫仑协同抗肿瘤作用具有理论基础。

发明内容

本发明提供了新型IRE1a核酸酶抑制剂紫草素以及紫草素与戒酒药双硫仑协同抗肿瘤的组合方式。

所述紫草素的浓度为2.5μM，所述双硫仑的浓度为0.25μM。

有益效果：

本发明确定的紫草素作为新型IRE1a抑制剂有较好的抑制。

附图说明

图1示出在内质网应激诱导剂衣霉素(TM)诱导IRE1-XBP1激活后紫草素(SKN)对人宫颈癌细胞系HeLa(图1A)或人多发性骨髓瘤细胞系8226(图1B)XBP1剪接的抑制以及在双硫仑(DSF)诱导IRE1-XBP1激活后SKN对人肺癌细胞系A549 XBP1剪接的抑制情况(图1C)。结果表明，SKN在10-100范围内对XBP1剪接有较好的抑制。

图2示出紫草素(SKN)与双硫仑(DSF)在所指示浓度下对人肺癌细胞系A549单用或联用的抑制率(％)及协同得分【其中，图A为单用或联用的抑制率(％)矩阵，B为协同分数三维展示；分数0表示协同作用，分数0表示拮抗作用】。结果表明，SKN与DSF在A549细胞具有协同作用，协同得分最高时药物使用浓度为2.5μM SKN+0.25μM DSF(10:1)。