[发明专利]一种泡沫分离β-葡萄糖苷酶融合蛋白的方法

权利要求书

1.一种泡沫分离β-葡萄糖苷酶融合蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.制备含有融合蛋白GLEGB的粗酶液：构建表达融合蛋白GLEGB的质粒，转入表达菌中诱导表达；破碎菌体后离心取上清，即为含有融合蛋白GLEGB的粗酶液；

所述融合蛋白GLEGB为将类弹性蛋白ELP，石墨烯结合肽GB用连接肽linker连接至葡萄糖苷酶Glu所融合形成的Glu-linker-ELP-GB融合蛋白GLEGB；

S2.粗酶液的泡沫性能测定；使用泡沫分析仪分析不同浓度粗酶液样品泡沫高度和泡沫形态随时间的变化；

S3.使用泡沫分离设备初步分离纯化粗酶液中的融合蛋白GLEGB；

S4.结合ITC对融合蛋白GLEGB的进一步分离纯化。

2.根据权利要求1所述的一种泡沫分离β-葡萄糖苷酶融合蛋白的方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述Glu的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；所述linker的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示；所述ELP的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.3所示；所述GB的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.4所示。

3.根据权利要求1所述的一种泡沫分离β-葡萄糖苷酶融合蛋白的方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述构建的表达融合蛋白GLEGB的质粒为pET-GLEGB，所述表达菌为大肠杆菌BL21。

4.根据权利要求1所述的一种泡沫分离β-葡萄糖苷酶融合蛋白的方法，其特征在于，所述步骤S2中，粗酶液的泡沫性能测定包括以下步骤：将一定体积的待测溶液缓慢倒入DFA-100泡沫分析仪中，打开鼓气装置，固定气速鼓气一定时间后，将其关闭；等待泡沫消泡；测量过程中，调整发酵液的浓度，用泡沫分析仪器软件ADVANCE在线记录各样品泡沫高度和泡沫形态随时间的变化。

5.根据权利要求1所述的一种泡沫分离β-葡萄糖苷酶融合蛋白的方法，其特征在于，步骤S3中的泡沫分离设备包括空气压缩机(1)、气体流量计(2)、进料口(3)、阀门(4)、泡沫分离柱(5)、残留液体出口(6)和泡沫收集装置(7)；所述气体流量计(1)的输入端与空气压缩机(2)用软管相连，输出端与泡沫分离柱(5)底端相连；所述进料口(3)通过所述阀门(4)连通所述泡沫分离柱(5)侧壁的中上部；所述残留液体出口(6)设置在所述泡沫分离柱(5) 的下方的侧壁上，所述泡沫收集装置(7)位于泡沫分离柱(5)的顶端出口处。

6.根据权利要求5所述的一种泡沫分离β-葡萄糖苷酶融合蛋白的方法，其特征在于，所述泡沫分离柱(5)可以连接循环水浴以控制其温度，其材质为有机玻璃，且泡沫分离柱(5)的直径为30mm，高度为600mm，其内部设有气体分布器，孔径为200μm。

7.根据权利要求5所述的一种泡沫分离β-葡萄糖苷酶融合蛋白的方法，其特征在于,所述步骤S3具体包括以下步骤：

取适量的GLEGB粗酶液将其用50mM,pH8.0的Tris-HCl缓冲溶液稀释为一定的蛋白浓度，将稀释后的酶液注入泡沫分离柱(5)，打开气体流量计(2)，设置合适的气体流速，进行泡沫分离，收集泡沫，直到泡沫不能连续鼓出时停止收集；将收集到的泡沫进行破泡处理，之后准确记录消泡液的体积并测定蛋白浓度和比酶活。