[发明专利]一种鸢尾丝囊霉菌分子检测的特异引物及其检测方法

说明书

本发明属于农业生物技术领域，具体为一种鸢尾丝囊霉菌分子检测的特异引物及其检测方法，根据鸢尾丝囊霉菌ITS序列，通过NCBI数据库的Primer‑BLAST筛选出3对扩增产物大小不同的特异引物。利用PCR技术筛选出1对引物能够特异性扩增鸢尾丝囊霉菌，灵敏度可达10‑3 ng/μL。本发明利用ITS‑PCR技术建立了特异引物Ai2‑F/Ai2‑R的鸢尾丝囊霉菌的快速分子检测体系，该方法快速、准确、灵敏度高，可应用于鸢尾丝囊霉菌的鉴定和早期预测预报。

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种鸢尾丝囊霉菌分子检测的特异引物及其检测方法。

背景技术

丝囊霉属(Aphanomyces)属于鞭毛菌亚门真菌，是卵菌纲、水霉目、水霉科中的一属，常见的水霉科真菌还包括绵霉属、水霉属等，其中有些种类是引起稻苗绵腐病和鱼类水霉病的病原菌。由丝囊霉属真菌引起的植物病害在国内外均有报道。

1940年，Weime发现根腐丝囊霉菌（Aphanomyces euteiches）和一种镰刀属真菌（Fusarium sp.）侵染箭筈豌豆，引起根腐病。1974年，日本首次发现丝囊霉属真菌引起荷兰鸢尾基腐病，又称黄化腐败病，其病原为鸢尾丝囊霉（Aphanomyces iridis Ichitani Kodama）。在我国甘肃河西灌区，由黑腐丝囊霉（Aphanomyces cochlioides）引起的甜菜黑腐病是一种重要病害。另外，在我国福建、青海和甘肃地区，根腐丝囊霉（Aphanomyceseuteiches Drechs）可引起豌豆的根腐病。2017年，李小杰等初次报道了由鸢尾丝囊霉（Aphanomyces iridis）引起的烟草漂浮苗根腐病，主要症状表现在感病烟苗生长缓慢、植株矮小、叶色发黄、根部呈现褐色变软坏死、根系少，严重的致全株萎焉。

由鸢尾丝囊霉（Aphanomyces iridis）引起的烟草漂浮苗根腐病是烟草上的新病害，目前对该病害的认识水平有限，还不能及早诊断，导致防治效果不佳，严重影响烟苗质量，给烟草生产带来巨大威胁，造成严重的经济损失。如果能够对该病害进行早期监测，在病害尚未表现出明显症状时，及时采取措施进行有效防控，对减少病害所造成的经济损失具有重要意义。

发明内容

为解决上述背景技术中提出的问题。本发明提供了一种鸢尾丝囊霉菌分子检测的特异引物及其检测方法，对减少病害所造成的经济损失具有重要意义。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种鸢尾丝囊霉菌分子检测的特异引物，包括Ai2-F和Ai2-R，：所述Ai2-F为上游引物，所述Ai2-R下游引物，所述Ai2-F和所述Ai2-R的序列为：

Ai2-F：GGCGGTAGTTTTGCTTGTGT；

Ai2-R：ATTCAGCGGGTAGTCTTGTCT。

一种鸢尾丝囊霉菌分子检测的特异引物的检测方法，包括以下步骤：

S1：以鸢尾丝囊霉菌基因组DNA为模板，利用真菌通用引物对ITS1/ITS4扩增并测序获得ITS序列；

S2：根据鸢尾丝囊霉菌ITS序列，通过NCBI数据库的Primer-BLAST筛选出3对扩增产物大小不同的引物；

S3：分别以鸢尾丝囊霉菌（Aphanomyces iridis）和烟草疫霉菌(Phytophthoranicotianae)、烟草串珠霉菌（Thielaviopsis basicola）、烟草交链孢菌（Alternariaalternata）、烟草立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、烟草胶孢炭疽菌（Colletotrichumgloeosporioides）、烟草拟茎点霉菌（Phomopsis sp.）、烟草尖孢镰刀菌（Fusariumoxysporum）的基因组DNA为模板，利用PCR技术筛选出能够特异性扩增鸢尾丝囊霉菌的引物对Ai2-F/Ai2-R；