[发明专利]一种可用于Protein A亲和层析连续流工艺开发的研究方法在审
申请号: | 202111187779.9 | 申请日: | 2021-10-12 |
公开(公告)号: | CN113880907A | 公开(公告)日: | 2022-01-04 |
发明(设计)人: | 王晨阳;王齐磊;周逢云 | 申请(专利权)人: | 郑州创迈生物科技有限公司 |
主分类号: | C07K1/22 | 分类号: | C07K1/22;C07K16/00 |
代理公司: | 郑州银河专利代理有限公司 41158 | 代理人: | 裴景阳 |
地址: | 450000 河南省郑州市航空港经济综合实验*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 protein 亲和 层析 连续流 工艺 开发 研究 方法 | ||
1.一种可用于Protein A亲和层析连续流工艺开发的研究方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)批次亲和层析工艺参数开发阶段:包括该层析工艺中的上样、洗杂、洗脱、清洗及保存,各个阶段所需缓冲液组分、pH、电导、保留时间以及冲洗体积工艺参数优化,开发基于层析填料的推荐工艺参数以及平台化工艺技术条件,同时也要考虑项目中目的蛋白样品的稳定性特性;
(2)单柱亲和层析工艺穿透曲线确认阶段:在亲和工艺参数确定基础上,对亲和层析上样动态载量进行考察,对不同上样保留时间下样品动态载量进行考察,不同保留时间下样品的最大结合载量有一定的变化,确定合适的上样保留时间以及该保留时间下的最大上样载量,不同项目间差异较大,需针对不同的项目特点以及工艺特点,进行实验测试;
(3)双柱亲和层析工艺上样载量确认阶段:在单柱亲和层析穿透曲线确定基础上,对双柱亲和层析过程中,柱位1以及柱位2样品吸附分配比例进行确认,对不同上样载量下柱位1洗脱样品质量以及柱位2的洗脱样品质量比例进行考察,确定合适的柱1以及柱2结合样品质量比,并确定双柱最佳上样载量,保证2柱位串联上样中,第2根层析柱无样品穿透;
(4)3柱位或者4柱位连续流层析确认阶段I:在双柱串联工艺上样载量结果确定基础上,对3柱位或者4柱位进行连续层析,确认其工艺在收率工艺属性方面具有可行性,该过程利用3PCC连续层析系统进行,对初始第1次串联上样体积V1以及后续串联上样体积V2进行设置,上样体积V1:V2比列同m1:m2比例确保一致,保证在连续循环过程中,不产生样品积累效应;
(5)3柱位或者4柱位连续流层析确认阶段II:主要在亲和连续层析确认阶段I基础上,对多循环连续层析,层析柱填料使用寿命以及系统稳定性进行确定。
2.如权利要求1所述的可用于Protein A亲和层析连续流工艺开发的研究方法,其特征在于:步骤1各工艺的保留时间大于等于5min。
3.如权利要求1所述的可用于Protein A亲和层析连续流工艺开发的研究方法,其特征在于:步骤2~5中各工艺的保留时间大于等于2.5min。
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