[发明专利]一种可用于Protein A亲和层析连续流工艺开发的研究方法

权利要求书

1.一种可用于Protein A亲和层析连续流工艺开发的研究方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)批次亲和层析工艺参数开发阶段：包括该层析工艺中的上样、洗杂、洗脱、清洗及保存，各个阶段所需缓冲液组分、pH、电导、保留时间以及冲洗体积工艺参数优化，开发基于层析填料的推荐工艺参数以及平台化工艺技术条件，同时也要考虑项目中目的蛋白样品的稳定性特性；

(2)单柱亲和层析工艺穿透曲线确认阶段：在亲和工艺参数确定基础上，对亲和层析上样动态载量进行考察，对不同上样保留时间下样品动态载量进行考察，不同保留时间下样品的最大结合载量有一定的变化，确定合适的上样保留时间以及该保留时间下的最大上样载量，不同项目间差异较大，需针对不同的项目特点以及工艺特点，进行实验测试；

(3)双柱亲和层析工艺上样载量确认阶段：在单柱亲和层析穿透曲线确定基础上，对双柱亲和层析过程中，柱位1以及柱位2样品吸附分配比例进行确认，对不同上样载量下柱位1洗脱样品质量以及柱位2的洗脱样品质量比例进行考察，确定合适的柱1以及柱2结合样品质量比，并确定双柱最佳上样载量，保证2柱位串联上样中，第2根层析柱无样品穿透；

(4)3柱位或者4柱位连续流层析确认阶段I：在双柱串联工艺上样载量结果确定基础上，对3柱位或者4柱位进行连续层析，确认其工艺在收率工艺属性方面具有可行性，该过程利用3PCC连续层析系统进行，对初始第1次串联上样体积V1以及后续串联上样体积V2进行设置，上样体积V1:V2比列同m1：m2比例确保一致，保证在连续循环过程中，不产生样品积累效应；

(5)3柱位或者4柱位连续流层析确认阶段II：主要在亲和连续层析确认阶段I基础上，对多循环连续层析，层析柱填料使用寿命以及系统稳定性进行确定。

2.如权利要求1所述的可用于Protein A亲和层析连续流工艺开发的研究方法，其特征在于：步骤1各工艺的保留时间大于等于5min。

3.如权利要求1所述的可用于Protein A亲和层析连续流工艺开发的研究方法，其特征在于：步骤2～5中各工艺的保留时间大于等于2.5min。