[发明专利]一种同步高效分离多种紫杉烷的方法

说明书

本发明属于分离纯化技术领域，更具体地，涉及一种同步高效分离多种紫杉烷的方法。本发明首先通过有机试剂对红豆杉枝叶进行提取，提取液浓缩后添加水和醇类，混合均匀后静置沉淀，过滤获得醇沉上清液，然后直接对该醇沉上清液利用大孔树脂层析柱进行吸附和梯度洗脱，经过HPLC检测并合并相同组分后，分别浓缩获得不同高含量紫杉烷粗品。本方法可快速提升红豆杉提取物中十多种重要紫杉烷产品纯度，生产周期短，纯化效率高，方法简单易操作、溶剂使用少，适于工业化应用和市场推广。

技术领域

本发明属于分离纯化技术领域，更具体地，涉及一种同步高效分离多种紫杉烷的方法。

背景技术

紫杉醇(Paclitaxel)是一种二萜类化合物，作为一种高效、广谱、活性强和作用机制独特的天然抗癌药物，尤其是对卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌等，并逐渐推广到更多的癌症治疗中。但由于在红豆杉枝叶中紫杉醇含量非常低，约占植物干重的0.005～0.06％，同时还存在大量与紫杉醇结构类似的紫杉烷化合物，这些结构复杂的小分子化合物。目前拥有多种化学半合成途径，可将对这些与紫杉醇仅有少量基团不同，母核结构一致的紫杉烷化合物，转化为紫杉醇、多烯紫杉醇或卡巴他赛等多种具有良好抗肿瘤效果的药物。专利文献CN200910010554.9公开了一种紫杉醇的半合成方法，应用效果是利用10-去乙酰基-7-木糖紫杉醇为起始原料，首先通过将7位的木糖基氧化，然后在10位和2′位的羟基上引入乙酰基，最后肼解得到目标产物紫杉醇；专利文献CN200710173713.8公开了一种多烯紫杉醇的半合成方法，应用效果是以保护的10-DAB与合成的C-13侧链水解产物进行缩合反应、然后打开唑啉环、在侧链的氮上接上叔丁氧羰基、最后脱除7、10位的保护得到多烯紫杉醇。目前依然有大量与紫杉烷结构类似物具有可转化为紫杉醇、多烯紫杉醇或卡巴他赛的潜质。

目前，文献报道的对紫杉醇及多种紫杉烷同步分离纯化的方法主要集中于前期样品预处理，并且样品处理后获得的紫杉烷种类和含量均不高。专利文献CN201910960435.3公布了一种初步分离天然紫杉醇及紫杉烷类化合物的工业化方法，主要是通过提取、萃取、硅胶柱层析结合大孔树脂柱层析，实现同步获得天然紫杉醇、10-脱乙酰基紫杉醇、10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的有效分离，证明大孔树脂可有效提升多种紫杉烷含量，但其仅限上述3种目标紫杉烷化合物，对红豆杉资源综合利用率不高，同时萃取工艺会产生大量废水，污水处理成本又很高。专利文献CN201110167134.9公布了一种分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法，可通过混合多种大孔树脂进行柱层析，获得富含10-DAB、10-去乙酰基-7-木糖紫杉醇和紫杉醇的粗产品，产品种类较少，同时样品纯化后纯度提升不多。因此，急需进一步开发高效分离纯化紫杉醇及其前体物质的技术，提高紫杉烷分离纯化效率，同时提高红豆杉资源综合利用率。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明提供了一种同步高效分离多种紫杉烷的方法，该方法利用醇沉工艺可较好的保留多种紫杉烷含量的情况下快速去除样品中水溶性杂质，减小大孔树脂柱层析压力；结合大孔树脂柱层析梯度洗脱工艺，将紫杉烷产品根据极性大小进行分批收集，快速提升多种重要紫杉烷含量，解决了现有技术同步分离多种紫杉烷方法中存在的废水量大、分离效率低、纯度低、分离出的紫杉烷种类数量少等的技术问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种同步高效分离多种紫杉烷的方法，包括如下步骤：

(1)将红豆杉枝叶粉碎后，采用有机试剂进行提取，并对提取液进行浓缩至其密度大于1，获得浓缩液；

(2)将步骤(1)获得的浓缩液与水混合，并加入C1～C4醇类，搅拌均匀后，继续加入无机盐，室温条件下静置数小时，然后过滤获得上清液；

(3)将步骤(2)获得的上清液从大孔树脂层析柱进液口注入，进行上样处理，然后依次选用C1～C4醇类与水不同比例的混合溶剂进行梯度洗脱，借助HPLC检测，合并相同组分样品，并进行浓缩，干燥后获得多种紫杉烷粗品。

优选地，步骤(1)所述有机试剂为甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或多种。