[发明专利]四价对称双特异性抗体

说明书

本发明涉及一种四价对称双特异性抗体，其结构为F(ab)₂‑(Fv)₂‑Fc的4价对称双特异性抗体，包含2条相同的融合重链和2条相同的融合轻链。

本申请是国际申请号为PCT/CN2019/095603，国际申请日为2019年7月11 日，进入中国国家阶段申请号为201980050120.3，进入中国国家阶段日期为2021 年1月27日，发明名称为“四价对称双特异性抗体”的分案申请。

技术领域

本发明涉及抗体领域。具体地，涉及双特异性抗体，包含其的药物组合物及其用途。

背景技术

双特异性抗体(Bispecific antibody，BsAb)为具有两种不同结合特异性的抗体或抗体类分子。双特异性抗体广泛应用于生物医学，尤其是针对肿瘤的免疫治疗中。

双特异性抗体可通过例如化学工程、细胞工程以及基因工程的方法制备。基因工程的优势在于能够容易地改造抗体，使得能够设计和生产许多不同形式的双特异性抗体片段，包括双特异性IgG(BsIgG)、附加IgG(appended IgG)、双特异性抗体片段(BsAbfragments)、双特异性融合蛋白(Bispecific fusion protein)和双特异性抗体偶联物(BsAb conjugates)五大类(参见Christoph Spiess,Qianting Zhai,Paul J.Carter,Alternative molecular formats and therapeutic applications for bispecificantibodies.Molecular Immunology 67(2015)95–106)。

第一类：双特异性IgG，具有与天然单抗相似的结构和分子量，但具有两个不同的Fab，(1)早期的Triomab技术通过将大鼠和小鼠的杂交瘤再融合形成“杂交-杂交瘤”，从而产生小鼠大鼠嵌合双特异性抗体，根据大、小鼠Fc对亲和填料的选择性在纯化时获得目的产物，该技术存在表达量低，纯化收率低的缺点。 (2)后期通过抗体工程技术如亮氨酸拉链(Lucine zipper)、“杵入臼” (Knobs-into-holes)或静电转向(electrostatic steering)改造Fc，使两个不同的重链形成异二聚体，再利用共同轻链(common light chain)、“杵入臼”或静电转向技术使轻-重链正确配对，或者设计不同的轻链亚型κ链和λ链，利用分别对κ链和λ链特异性的亲和填料进行纯化获得正确的目的产物。这类双特异性抗体具有接近天然抗体的药代动力学，但存在杂质难以鉴定和去除的缺点。

第二类：附加IgG，以天然单抗IgG为骨架，在抗体重链或轻链的N端或C 端融合抗原结合结构域，如可变区片段(Fv)、单链可变区片段(ScFv)、抗原结合片段(Fab)或多肽等，该类双特异性抗体分子量大于150kDa，主要为对称结构，药代动力学类似天然抗体，甚至半衰期更长，纯化上具有一定便利，但存在表达量不高、分子不够稳定等缺点。

第三类：双特异性抗体片段，保留抗体可变区片段，缺失部分甚至全部的抗体恒定区，重链可变区片段(VH)和轻链可变区片段(VL)一般通过接头(linker) 蛋白连接形成ScFv，或者自发配对形成Fv。该类双特异性抗体分子量不超过 150kDa，半衰期短，存在表达量很难达到单抗水平，分子不够稳定，纯化收率低等缺点。

第四类：双特异性融合蛋白，保留抗体可变区片段，同时融合了其他蛋白或药物分子，如T细胞受体恒定区、人血清白蛋白或毒素蛋白等。该类双特异性抗体分子量在75～160kDa之间，存在纯化工艺上的挑战，分子稳定性也有一定风险。

第五类：双特异性抗体偶联物，将两个不同的单抗或ScFv通过化学方法偶联在一起。该类抗体工艺复杂，最终收率低，目前国际上基本没有使用。

上述各类双特异性抗体均存在一些缺点，导致产品在临床使用上具有潜在的风险。为解除这些风险，本申请发明了一种新型双特异性抗体。

发明内容