[发明专利]外周血外泌体miRNA联合标志物在制备检测HBV阳性肝硬化早期肝癌试剂盒中的应用

说明书

本发明公开一种外周血外泌体miRNA联合标志物在制备检测早期肝癌试剂盒中的应用。miRNA联合标志物为来源于血浆外泌体的hsa‑miR‑1307‑3p、hsa‑miR‑221‑3p、hsa‑miR‑323b‑3p、hsa‑miR‑150‑5p、hsa‑miR‑134‑5p、hsa‑miR‑4433b‑3p、hsa‑miR‑222‑3p。早期肝癌为HBV阳性(HBV+)且肝硬化(LC+)的原发性HCC。本发明针对HBV阳性(HBV+)且肝硬化(LC+)的原发性HCC予以检测，针对性更强，检测结果也更有说服力。

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学诊断领域，具体涉及一种外周血外泌体miRNA联合标志物在制备检测早期肝癌试剂盒中的应用。

背景技术

原发性肝癌是世界范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。肝细胞癌(HCC)是原发性肝癌的主要形式，通常由肝硬化、HBV感染等慢性肝病演化而来。早期HCC五年生存率为50％-70％，而晚期肝癌患者仅为10％-19％，因此，早诊早筛是肝癌治疗的关键。由于缺乏有效区分早期肝癌患者和慢性肝病患者的早期诊断方法，目前HCC的诊断主要还是依赖于影像学、血清AFP和组织活检，具有一定的滞后性，大多数患者在初诊时已经是晚期。因此，临床上亟需开发新型生物标志物用于肝癌患者的早期诊断。

外泌体(exosome)是一类直径大小在40-160nm(平均100nm)，能被大多数细胞分泌，进入血液循环系统的胞外囊泡。外泌体携带了膜蛋白、核蛋白、DNA、mRNA、非编码RNA等生物信息，参与细胞活动的重要调控，在肿瘤转移、免疫调控机制、疾病发生发展中发挥重要作用。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长度在19-24nt的非编码单链RNA，一般通过与目标信使RNA(mRNA)部分或完全的互补配对，导致mRNA的降解或翻译的抑制，起到转录后调控的作用，在生物发育的各个环节，以及包括肿瘤在内的多种疾病的发生发展中发挥功能。同时，相比于外泌体中其他类型的生物信息，miRNA片段更小，更为稳定。因此，来源于外泌体的miRNA可作为一类潜在的肿瘤分子标志物。

本领域已发现has-miR-29a、has-miR-29c、has-miR-133a、has-miR-143、has-miR-145、has-miR-192、has-miR-505等7个miRNA组成的panel可用于肝癌的动态监测。本领域也发现基于has-miR-122、has-miR-192、has-miR-21、has-miR-223、has-miR-26a、has-miR-27a、has-miR-801的检测可用于肝癌的早期诊断。但是，原发性肝癌发病机理较为复杂，不同类型的患者生物标志物可能不尽相同，现有panel一般针对所有类型肝癌患者，缺乏针对性。本发明基于来源于外周血外泌体中异常表达的miRNA，针对HBV阳性(HBV+)且肝硬化(LC+)的HCC患者提出针对性panel用于肝癌的早期诊断。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种外周血外泌体miRNA联合标志物在制备检测早期肝癌试剂盒中的应用，其中miRNA联合标志物为来源于血浆外泌体的hsa-miR-1307-3p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-323b-3p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-134-5p、hsa-miR-4433b-3p、hsa-miR-222-3p。

作为优选，所述的试剂盒中包括：特异性检测人hsa-miR-1307-3p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-323b-3p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-134-5p、hsa-miR-4433b-3p和hsa-miR-222-3p的检测试剂。

作为优选，所述早期肝癌为HBV阳性(HBV+)且肝硬化(LC+)的原发性HCC。

在本发明的另一个方面，所述miRNA表达水平降低为|log₂ Fold Change|＞1.5，p-value0.05。