[发明专利]一种灰树花菌丝体多肽和β-葡聚糖的联合制备方法

说明书

本发明属于天然产物提取分离技术领域，具体提供了一种灰树花菌丝体多肽和β‑葡聚糖的联合制备方法。以发酵灰树花菌丝体为原料，经过乙醇脱脂、干燥、超微粉碎、酶法提取、热碱提取、中和、离心、微滤、超滤脱盐浓缩、喷雾干燥等工序生产灰树花多肽和β‑葡聚糖。利用该方法制备的灰树花提取物中多肽和β‑葡聚糖的含量高，生产周期短，适合工业化生产。

技术领域

本发明涉及天然产物提取分离技术领域，具体涉及一种灰树花菌丝体多肽和β-葡聚糖的联合制备方法。

背景技术

灰树花(Grifola frondosa)为担子菌亚门、层菌纲、无隔担子菌亚纲、非褶菌目、多孔菌科、树花菌属真菌,又名贝叶多孔菌、千佛菌、栗子蘑、云覃、莲花菌等，日本称之为舞茸(Maitake)。其药用作用最早记载于日本阪然的《菌谱》中，“味甘、平、无毒,可治痔疮”。东汉时期的《神农本草经》中记载了其“调和脾胃，安定神志”的功效。灰树花菌丝体具有独特的芳香味，富含多种维生素、矿物质与生物活性物质。灰树花β-葡聚糖是从灰树花菌丝体中提取分离得到的一种灰树花多糖，由具有β-(1-3)侧链的β-(1-6)葡聚糖和具有β-(1-6)侧链的β-(1-3)葡聚糖组成，能够激活多种免疫细胞并释放细胞因子，提高机体的免疫力，在一定程度上缓解亚健康症状。灰树花多肽是指经蛋白酶水解并分离得到的小分子肽，具有降血压、降血脂、抗疲劳、抗菌、提高免疫力和抗氧化等功效，与大分子蛋白质相比，更容易被人体吸收。

灰树花提取物现有提取技术有水提法、碱提法、酶提法、超声波辅助法和微波辅助法等，其中超声波辅助法和微波辅助法对设备要求高，生产能耗高，生产成本高。水提法和酶提法得到的灰树花提取物中β-葡聚糖含量低。碱提法常用氢氧化钠，废水量大，得到的灰树花提取物中β-葡聚糖含量高，但是多肽含量低。因此，如何提供一种低能耗、高多肽和β-葡聚糖收率的从灰树花菌丝体中联合提取多肽和β-葡聚糖的方法成为本领域亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述不足，提供了一种灰树花菌丝体多肽和β-葡聚糖的联合制备方法。本发明以发酵灰树花菌丝体为原料，经过乙醇脱脂、干燥、超微粉碎、酶法提取、热碱提取、中和、离心、微滤、超滤脱盐浓缩、喷雾干燥等工序生产灰树花多肽和β-葡聚糖。利用该方法制备的灰树花提取物中多肽和β-葡聚糖的含量高，生产周期短，适合工业化生产。

本发明的技术方案为：该方法首先采用乙醇脱脂破坏灰树花菌丝体细胞壁，然后采用超微粉碎工艺进行物理破壁，使得下一步酶法和碱提法联合提取时，多肽和多糖更容易提取出来。先采用蛋白酶酶解提取，获得灰树花多肽含量较高的提取液，然后再用碱提，获得灰树花β-葡聚糖含量较高的提取液，合并提取液经膜处理，去除大分子物质和小分子的盐，喷雾干燥得到高多肽和β-葡聚糖含量的灰树花提取物。生产用碱采用氢氧化钾代替传统的氢氧化钠，产生的废水可用于液体钾肥的开发。

本发明一种灰树花菌丝体多肽和β-葡聚糖的联合制备方法，具体包括以下步骤：

(1)将发酵灰树花菌丝体和乙醇加入到提取容器中搅拌脱脂12～24h，离心，干燥后进行超微粉碎；

所述的乙醇优选食品级95％乙醇；加入后，乙醇的质量百分比在75％以上。

超微粉碎得到的灰树花菌丝粉能过200目筛；

(2)将灰树花超微粉和水加入到提取容器中，加入蛋白酶，搅拌提取2～6h，100℃灭酶10min，冷却，离心，分别收集清液和固形物，清液用盐酸调节pH至3.5～4.0，离心，收集清液备用；

(3)向固形物中加入碱溶液，80℃～90℃温度下提取2h，提取1～3次，提取结束后，合并提取液，用乙酸中和，离心，收集清液，沉淀用于有机肥加工；

(4)合并步骤(2)和(3)中的离心清液，采用孔径0.2～0.5μm的微滤膜过滤，透过液再用1kD的超滤膜脱盐，连续向截留液中加入纯净水洗脱除盐，直至截留液的电导率小于1mS/cm，可溶性固形物含量2～3％，停止超滤；