[发明专利]一种靶向肝星状细胞的仿生纳米药物的制备方法及其应用

权利要求书

1. 一种靶向肝星状细胞的仿生纳米药物的制备方法，其特征在于，利用肝星状细胞的同源靶向功能，包裹诱导肝星状细胞凋亡的疏水性小分子药物BAY 11-7082，通过超声共挤出的方法得到具有肝星状细胞靶向的纳米药物；具体包括以下步骤：

1）制备PLGA-BAY纳米颗粒：称取20mg的PLGA与2.5mg BAY 11-7082溶于1mL二氯甲烷中；加入0.2mL水，用细胞破碎仪超声，超声条件为功率285W，5分钟，开1s，关2s；加入2mL质量浓度为2%的胆酸钠水溶液，用细胞破碎仪超声，超声条件为功率285W，5分钟，开1s，关2s；将超声好的液体逐滴滴加到10mL 0.5%的胆酸钠水溶液，分散10分钟；将分散好的溶液进行旋蒸，除去二氯甲烷，旋蒸至无气泡产生；将旋蒸得到的溶液离心，离心条件为12000rpm，25℃，20分钟；离心结束后，弃掉上清，用水洗两次，离心，最终得到的PLGA-BAY纳米颗粒重悬至1mL水中，备用；

2）制备HSC-PLGA-BAY纳米药物：将PLGA-BAY纳米颗粒与肝星状细胞膜按照5：1 的质量比混合，超声，功率为 100 W，超声5分钟，之后用脂质体挤出器挤出，依次过400nm，200nm，100nm孔径的膜，最终得到肝星状细胞膜修饰的纳米药物。

2.根据权利要求1所述的靶向肝星状细胞的仿生纳米药物的制备方法，其特征在于，所述的肝星状细胞膜提取方法为：

1）准备启动缓冲液；225 mM甘露醇，75mM蔗糖，30mM Tris-HCl；

2）准备隔离缓冲液；225 mM甘露醇，75mM蔗糖，30mM Tris-HCl，0.5% BSA，0.5mM EGTA，加入100μl PMSF；

3）待购买的原代HSC长至80%密度，弃掉培养基，PBS冲洗，加入5mL PBS，将培养

皿置于冰上；

4）用细胞刮刀小心刮取细胞，离心，离心条件为：1000rpm，4℃，5分钟，离心结束后，取出离心管，弃掉上清；

5）沉淀加入隔离缓冲液，15cm皿加4 mL，重悬；

6）将细胞悬液经细胞破碎仪破碎，破碎功率30%，时间为 5 分钟；

7）离心，离心条件为：3000g，4 ℃，5分钟，离心结束后收集上清，转移至新的离心管内；

8）再次离心，离心条件为：10000 g，4 ℃，10分钟，收集上清，转移至超离管内；

9）超速离心，离心条件为：100000 g，4 ℃，2小时，离心结束后取出离心管，弃掉上清，沉淀用PBS重悬，然后将其转移至预冷的 EP 管里；

10）纳米蛋白定量，-80 ℃保存，即得。