[发明专利]一种借助细胞爬片的微藻分离方法

说明书

本发明提供了一种借助细胞爬片的微藻分离方法，属于微藻分离技术领域。本发明将稀释藻液滴于细胞爬片上，显微镜观察到细胞爬片上只有一个目的藻细胞时，把细胞爬片转移至培养基中进行培养。本发明将稀释藻液滴于细胞爬片上，利用细胞爬片的载体支撑作用可以确保目的藻转至培养基中，对实验者的操作要求不高，整个过程操作简便，易于掌握，更易于目的藻种的转移，精确度提高，加快分离藻种效率，分藻效果更好，容易获得纯种藻种，避免多次重复实验，比现有的微藻分离方法更快更灵敏。

技术领域

本发明属于微藻分离技术领域，尤其涉及一种借助细胞爬片的微藻分离方法。

背景技术

微藻是生态系统中重要的初级生产者，对于维持地球生态系统的平衡和稳定起到至关重要的作用。同时，由于微藻具有个体小、种类繁多、生长速度快、适应性强、培养容易和活性物质丰富等特点，被认为是一个巨大的资源宝库。许多微藻具有较高的蛋白质和油脂含量，富含多糖、不饱和脂肪酸、类胡萝卜素及其衍生物(如虾青素、叶黄素)等生物活性成分，具有极高的营养和药学价值，被广泛运用于食品、药品、化妆品、水产饲料和生物能源等领域。

在微藻的培养和应用中，首先需要从环境样品中获得纯种目的藻种，所以需要对污染的微藻进行单种分离；另外，为了丰富微藻的种类或科研需要，也常常从水体当中分离选育优良微藻，因而，微藻的分离技术十分重要，它是微藻培养和进一步应用的基础和关键环节。常用的分离藻种技术分为两大类，一是用液体培养基分离，常用的技术有样品系列稀释分离法、微吸管分离法、水滴分离法；二是用固体培养基分离的平板分离法。上述微藻分离方法对实验者的操作要求高，而且精确度不高，比如系列稀释分离法的逐步稀释过程是盲目的，最后得到的藻细胞未必是目的藻。而平板分离法限于在固体培养基中能够生长良好的藻种，固体培养皿的外壁、培养基的厚度会影响镜下观察，比如应用平板分离法分离钝顶节旋藻时发现，该藻种7天后会有部分藻体裂解进而死亡，藻丝容易缠绕，不易获得单个藻落，而且通过显微镜观察在培养皿上操作不便。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种利用细胞爬片进行微藻分离的方法，操作简便，更易于目的藻种的转移，精确度提高，加快藻种分离效率，使微藻分离更快更灵敏。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种借助细胞爬片的微藻分离方法，包括如下步骤：将稀释藻液滴于细胞爬片上，显微镜观察到细胞爬片上只有一个目的藻细胞时，把细胞爬片转移至培养基中进行培养。

优选的，所述稀释藻液为每滴仅有1个藻细胞。

优选的，所述培养基为液体培养基。

优选的，所述液体培养基为Zarrouk培养基。

优选的，所述微藻包括节旋藻。

优选的，所述节旋藻包括钝顶节旋藻、鄂尔多斯节旋藻、方胞节旋藻。

优选的，所述显微镜观察为先在低倍镜下观察到细胞爬片上只有一个目的藻细胞时转至高倍镜确认

本发明的有益效果：

本发明首次将在细胞免疫荧光实验中用到的细胞爬片用于微藻的分离，将稀释后的藻液滴加到细胞爬片上，确认含有单个目的藻种后再转移至培养基中进行培养，确保了目的藻种的转移，并且避免了直接将稀释藻液转移至培养基中培养时，藻液中其他杂菌或杂藻孢子等对目的藻种的不利影响，本发明方法可准确分离得到目的藻细胞，无需再进行多次培养分离重复试验，缩短了获得纯种目的藻种的时间。本发明利用细胞爬片的载体支撑作用可以确保目的藻转至培养基中，对实验者的操作要求不高，整个过程操作简便，易于掌握，更易于目的藻种的转移，精确度提高，加快分离藻种效率，分藻效果更好，容易获得纯种藻种，避免多次重复实验，比现有的微藻分离方法更快更灵敏。

具体实施方式