[发明专利]一种基于冻融循环提高DNA链置换反应速率的调控方法

权利要求书

1.一种基于冻融循环提高DNA链置换反应速率的调控方法，其特征在于，所述方法中，先通过液氮冷冻，为DNA链置换反应运行提供区室化结构；再解冻使得DNA和溶质含量的急剧下降，破坏活性和非生产性复合物之间的平衡；经多次的冷冻--解冻的冻融循环，允许DNA链置换反复重启，加速驱动反应的运行，实现DNA链置换反应速率的提高；

所述方法包括以下步骤：

(1)根据沃森-克里克碱基互补配对原则分别设计对应的核酸分子链A、I、C的序列；

所述核酸分子链I、C、A的序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示；

(2)将所述核酸分子链A、I、C分别溶解于pH＝8的tris-HCl缓冲溶液中，分别得到含核酸分子链A的溶液、含核酸分子链I的溶液、含核酸分子链C的溶液，然后在4℃下储存备用；

(3)将所述步骤(2)得到的含核酸分子链A的溶液、含核酸分子链C链的溶液混合；经过PCR仪进行退火形成含底物链D的溶液；将含核酸分子链A的溶液、含核酸分子链C链的溶液按1:1的摩尔比例进行混合；

(4)在pH＝8的tris-HCl缓冲溶液中将所述含底物链D的溶液与所述步骤(2)得到的含核酸分子链I的溶液混合；将所述含底物链D的溶液与所述含核酸分子链I的溶液按1:1的摩尔比例进行混合

(5)将所述步骤(4)得到的混合溶液置于液氮冷冻1min之后再37℃水浴5min解冻；

(6)重复1-9次所述步骤(5)，经1-9次冻融循环，实现DNA链置换反应速率的提高。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括以下步骤(7)：

(7)用荧光光谱仪收集荧光信号，完成核酸分子链置换反应的监测。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中利用Nupack软件设计核酸分子链序列。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)反复冻融循环加快DNA链置换反应速度。

5.如权利要求1所述的调控方法在用于核酸分子逻辑电路、神经网络的加速中的应用。