[发明专利]一种同时检测赭曲霉毒素A及黄曲霉毒素B1的荧光适配体传感器制备方法

权利要求书

1.一种同时检测赭曲霉毒素A及黄曲霉毒素B1的荧光适配体传感器制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）DNA双标记链的制备：由含有23个碱基的DNA链S1和含有26个碱基的DNA链S2，通过碱基互补配对的方式和DNA链S3连接而成；取1~2 μM的DNA链S1，S2和S3各10~20 μL于100~200 μL的离心管中，涡旋充分混匀，置于梯度PCR仪中执行退火程序；最终得到DNA链S3的3’和5’均被荧光基团标记，DNA链S1的3’端被猝灭基团标记，DNA链S2的5’端被猝灭基团标记的DNA双标记链；

（2）荧光适配体传感器是以由3’端被猝灭基团标记的DNA链S1，5’端被猝灭基团标记的DNA链S2及3’和5’均被荧光基团修饰的DNA链S3杂交而形成；当样本中含有目标物赭曲霉毒素A及黄曲霉毒素B1时，适配体链与目标物结合，使得荧光基团和猝灭基团彼此靠近，产生很强的FRET效应，造成荧光响应信号的变化，得到了一种同时检测赭曲霉毒素A及黄曲霉毒素B1的荧光适配体传感器。

2.根据权利要求1所述的一种同时检测赭曲霉毒素A及黄曲霉毒素B1的荧光适配体传感器制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的退火温度为95~100℃，时间为5~10 min，然后缓慢降温到4~10℃，保持30~45 min；所述的DNA链S1的3’端及DNA链S2的5’端的猝灭基团分别为BHQ₁，BHQ₂，TAMRA，Dabcyl中的一种；所述的修饰DNA链S3的3’和5’端的荧光基团分别为Cy3，Cy5，FAM，ROX，Alexa Fluor 488，Alexa Fluor 594中的一种；两者的荧光基团标记的颜色不同且在荧光光谱的激发波长下有不同的最大发射波长。

3.根据权利要求1所述的一种同时检测赭曲霉毒素A及黄曲霉毒素B1的荧光适配体传感器制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的缓冲溶液为Tris-HCl，PBS，1% BSA中的一种或两种。