[发明专利]人工重组的H5N6流感病毒及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种人工重组的H5N6流感病毒及制备方法和应用。本发明的一种人工重组的H5N6流感病毒具有高致病性禽流感病毒A/duck/Fujian/S1424/2020(H5N6)表面抗原血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因，但HA裂解位点呈典型低致病性禽流感病毒分子特征(‑RETR‑)，具有流感病毒鸡胚高滴度适应株A/PR/8/34(H1N1)的PB2，PB1，PA，NP，M和NS共6个内部基因，株号为H5‑Re13，保藏号为CCTCC NO：V202159。具有良好的鸡胚适应性，病毒生长滴度与野毒相比，可提高10倍以上；以此为疫苗株生产疫苗，可大大降低疫苗生产成本，提高疫苗质量。

技术领域

本发明涉及反向遗传学技术和动物传染病技术领域，具体涉及一种人工重组并致弱的 H5N6亚型重组流感病毒及其制备方法和应用。

背景技术

高致病性禽流感(avian influenza，AI)是由A型流感病毒引起的烈性呼吸道疾病，被世界动物卫生组织(OIE)定为A类传染病，AI不仅给世界养禽业造成了巨大的经济损失，而且严重威胁着人类生命安全，AI防控成了目前人兽共患传染病研究的焦点。禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)为分节段的负链RNA病毒，含有8个基因片段，容易发生基因突变和重组，产生新型病毒。根据病毒的表面蛋白，AIV被分为16个血凝素(HA)和9个神经氨酸酶(NA)亚型。我国家禽中已监测到多种 H5Nx亚型禽流感病毒，如H5N1、H5N2、H5N6、H5N8、H5N9等。

自2014年以来，高致病性H5N6亚型病毒逐渐取代我国早期的H5N1亚型病毒，成为我国家禽中传播和流行的优势毒株。我国采用疫苗免疫和扑杀相结合的综合措施应用于H5亚型高致病性AI的防控，家禽中未出现大规模的疫情。近期病原学监测发现，家禽中分离到的H5N6病毒发生抗原性变异，导致现有H5亚型禽流感疫苗无法提供完全有效保护，给家禽养殖业带来严重威胁；同时2021年上半年我国南方多个省份发生人感染H5N6病毒的病例，引起人们对其导致更大公共卫生危害的担忧。为有效控制我国家禽H5N6亚型禽流感病毒，避免其可能产生更大范围的公共卫生危害，本发明进行了人工重组的H5N6禽流感疫苗株的研制。

理想的流感病毒疫苗株应具备与流行株良好的抗原匹配性，对鸡胚无致病力及鸡胚高滴度生长性等条件。然而，很难从自然界分离具备上述条件的病毒作为疫苗株。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为：提供一种人工重组的H5N6流感病毒及其制备方法和应用。

本发明的技术方案为：重组的H5N6禽流感病毒，以高致病性H5N6亚型禽流感病毒A/duck/Fujian/S1424/2020(H5N6)为表面抗原血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因供体，但HA裂解位点具有典型低致病性禽流感病毒分子特征(-RETR-)；以流感病毒鸡胚高滴度适应株A/PR/8/34(H1N1)为PB2，PB1，PA，NP，M和NS共6个内部基因的供体，通过反向遗传操作方法，人工重组得到了1株重组的H5N6禽流感病毒，命名为A型流感病毒 A/Harbin/H5-Re13/2021(H5N6)(简称为H5-Re13株)，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址在中国武汉的武汉大学，其保藏号为CCTCC NO：V202159，保藏时间为2021年8月3 日。

本发明选用流感病毒的可在鸡胚内生长至很高滴度的实验室鸡胚适应株A/PR/8/34 (H1N1)的6个内部基因作为骨架基因，并选用2020年分离得到的高致病性禽流感病毒株A/duck/Fujian/S1424/2020(H5N6)的HA和NA基因作为表面基因，利用反向遗传学人工构建方法，制备了致弱的重组病毒H5-Re13株，该重组毒株将可作为H5N6流感的疫苗株。